Директен комплет RT-qPCR
Опис на комплет:
◮ Директен комплет RT-qPCR, кој користи Foreasy Reverse Transcriptase и Foreasy HS Taq DNA Polymerase развиени од Foregene, со уникатен реакционен пуфер, го прави овој комплет со силна отпорност и компатибилност и може директно да ја тестира реакцијата користејќи го Foregene Lysis системот како шаблон.Овој комплет може да се примени за комплет за откривање нуклеинска киселина COVID-19 и други патогени бактерии за развој на комплет за откривање нуклеинска киселина.
Опис
Комплетот Direct RT-qPCR обезбедува посебно спакуван RT-qPCR пуфер и високо ефикасен ензиммешавина (Taq, M-MLV, RI), што го прави погодно за создавање на задни комплети и системприлагодување, во рамките на едноставна верификација.
Спецификации
500 Т, 50 000 Т
Компоненти на комплетот
| Содржина на комплетот (20 μL систем за реакција) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
| 500 Т | 50.000 Т | |
| Директна ензимска смеса | 500 μL× 1 | 50 мл× 1 |
| 2× Директен RT-qPCR бафер | 1 мл× 5 | 500 мл× 1 |
| Упатство | 1 | 1 |
Оперативни чекори
Пред подготовка на реагенсот, сите реагенси во комплетот треба да се одмрзнат на собна температура и нежно да се измешаат.
A: Подгответе се of шаблон и реагенс
1. Подгответе го подготвен шаблон за РНК (Се препорачува да се користи сериски комплет Foregene Total RNA Isolation Kit за екстракција и прочистување на шаблонот за РНК) или производ за пукање примерок (Се препорачува да се користи системот Foregene Lysis), специфични прајмери (10 μM) и други релевантни потрошни материјали, инструмент.
2. Ставете го 2× Direct RT-qPCR бафер, RNase-Free ddH2O и 20× ROX референтна боја (ако е'е потребно) во кутија со мраз, правејќи ги да се стопат природно и нежно да се измешаат.
B: Подгответе се of RT-qPCR систем
Табела 1 : Подгответе се of RT-qPCR sсистем
| Компонента | Волумен | Конечна концентрација |
| 2× Директен RT-qPCR бафер | 10 μL | 1× |
| Директна ензимска смеса | 1μL | |
| Напреден прајмер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Обратен прајмер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Сонда (4 μM) | 1μL | 200 nM |
| Шаблон (РНК или лизат) | X μL | |
| 20×ROX референтна боја | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Вкупен волумен | 20μL |
C: Поставете на RT-qPCR реакција програма
Табела 2 : RT-qPCR реагираатon програма поставување (за пример: два-чекор метод)
| Чекор | Температура | Време | Циклуси | содржина | |
| 1 | 50 ℃ | 15 мин | 1* | 1 | Обратна транскрипција |
| 2 | 95 ℃ | 1 мин | 1 | Пред денатурација | |
| 3 | 95 ℃ | 10 сек | 40-45 | Денатурација | |
| 60 ℃ | 30 сек. 2* | Anneal/Extension | |||
Складирање и рок на траење
-Комплетот треба да се чува на -20± 5℃.Рокот на важност е 12 месеци.
-Избегнувајте повторени циклуси на замрзнување-одмрзнување (<5 циклуси).
