Комплет за изолација на тотална РНК на клетките
Опис на комплет:
Високо прочистена и висококвалитетна вкупна РНК може да се добие од различни култивирани клетки за 11 минути.
Без RNase
Работи на собна температура (15-25℃)
Со колумна за чистење на ДНК
Висок принос на РНК
Брзо: Завршете ја екстракцијата за 11 минути
Безбедност: Нема органска хемикалија
Опис
Овој комплет користи спин колона и формула развиени од Foregene, кои можат ефикасно да извлечат висока чистота и висококвалитетна вкупна РНК од клетки култивирани во плочи со 96, 24, 12 и 6 бунари.
Комплетот обезбедува ефикасна колона за чистење на ДНК, која лесно може да ги одвои супернатантот и клеточниот лиза, да ја врзе и отстрани геномската ДНК.Операцијата е едноставна и заштедува време.
TКолоната само за РНК може ефикасно да ја поврзе РНК со единствена формула.Голем број примероци може да се обработуваат истовремено.
Компоненти на комплетот
| Состав на комплет | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Бафер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Бафер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| Бафер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Бафер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без RNase | 10 мл | 40 мл |
| РНК-Само колона | 50 | 200 |
| Колона за чистење на ДНК | 50 | 200 |
| Упатство | 1 | 1 |
*Ве молиме носете ракавици и преземете заштитни мерки за време на операцијата бидејќи Buffer cRL1 и Buffer RW1 содржат иритирачки хаотропни соли.
Карактеристики и предности
■ Целиот процес се работи на собна температура (15-25℃), без ледена бања и центрифугирање на ниска температура.
■ Целиот комплет е без RNase, нема потреба да се грижите за деградација на РНК.
■ Колоната за чистење на ДНК специфично ја врзува ДНК, така што комплетот може да ја отстрани контаминацијата на геномската ДНК без да додаде дополнителна ДНаза.
■ Висок принос на РНК: само РНК Колоната и единствената формула можат ефикасно да ја прочистат РНК.
■ Брза брзина: лесна за ракување и може да се заврши за 11 минути.
■ Безбедност: Не е потребен органски реагенс.
■ Висок квалитет: прочистената РНК е со висока чистота, без протеини и други нечистотии и може да исполни различни последователни експерименти.
Апликација за комплет
Погоден е за екстракција и прочистување на вкупната РНК од култивирани клетки во плочи со 96, 24, 12 и 6 бунари.
Работен тек
Дијаграм
Дијаграмот на батеријата со агарозен гел на комплетот за изолација на клеточна РНК ги третираше горенаведените различни броеви на клетки, волуменско елуирање од 20 μl, земете 2 μl прочистена вкупна РНК 1%.
Складирање и рок на траење
Комплетот може да се чува 12 месеци на собна температура (15–25 ℃) или 2–8 ℃ подолго време (24 месеци).
Пуфер cRL1 може да се чува на 4 ℃ 1 месец по додавање на 2-хидрокси-1-етанетиол (опционално).
РНК не се екстрахира или приносите на РНК се ниски
Често има различни фактори кои влијаат на ефикасноста на обновувањето, како што се: содржината на RNA примерок од ткиво, начинот на работа, волуменот на елуцијата итн.
1. Ледена бања или криогена (4 °C) центрифугирање беше извршена за време на работата.
Препорака: Работете на собна температура (15-25 ° C) во текот на целиот процес, не правете ледена бања и центрифугирајте на ниски температури.
2. Неправилно зачувување на примерокот или прекумерно време на складирање на примерокот.
Препорака: Чувајте ги примероците на -80 °C или замрзнете ги во течен азот и избегнувајте повеќекратна употреба за замрзнување-одмрзнување;обидете се да користите свежо ткиво или култивирани клетки за екстракција на РНК.
3. Недоволна лиза на примерокот.
Препорака: При хомогенизирање на ткивото, проверете дали ткивото е доволно хомогенизирано и дека ткивните клетки се доволно поделени за да се објасни ослободувањето на РНК.
4. Елуентот не е правилно додаден.
Препорака: Потврдете дека ddH без RNase2O се додава по капка во средината на мембраната на колоната за прочистување.
5. Точниот волумен на апсолутен етанол не беше додаден во пуфер RL2 или пуфер RW2.
Препорака: Следете ги упатствата, додајте го точниот волумен на апсолутен етанол во Buffer RL2 и Buffer RW2 и добро измешајте пред да го користите комплетот.
6. Дозата на примерок од ткиво не е соодветна.
Препорака: Користете 10-20 mg ткиво или (1-5) × 106клетки на 500 μl пуфер RL1, бидејќи прекумерната употреба на ткиво може да резултира со намалена екстракција на РНК.
7. Несоодветен волумен на елуирање или нецелосно елуирање.
Препорака: Волуменот на елуција на колоната за прочистување е 50-200 μl;ако ефектот на елуција не е задоволителен, се препорачува да се продолжи времето на поставување на собна температура по додавање на претходно загреан ddH без RNase2О, на пр. 5-10 мин.
8. Колоната за прочистување има остатоци од етанол по миењето со пуфер RW2.
Препорака: Ако има остатоци од етанол по миењето со пуфер RW2, центрифугирање на празна цевка за 1 мин, времето за операција на центрифугирање на празна цевка може да се зголеми на 2 минути или колоната за прочистување може да се стави на собна температура 5 минути за соодветно да се отстрани преостанатиот етанол.
Прочистената РНК се разградува
Квалитетот на прочистената РНК е поврзан со фактори како што се зачувување на примерокот, контаминација со RNase и манипулација итн.
1. Примероците од ткивото не се чуваат навреме.
Препорака: Ако примероците од ткиво или клетките не се користат навремено по собирањето, веднаш да се криопрезервира на -80 °C или течен азот.За екстракција на РНК, користете ново земено ткиво или клеточен примерок секогаш кога е можно.
2. Повторено замрзнување-одмрзнување на примероци од ткиво.
Препорака: Кога складирате примероци од ткиво, најдобро е да ги исечете на мали парчиња за зачувување и да отстраните едно од парчињата кога ги користите за да избегнете повторено замрзнување-одмрзнување на примерокот и разградување на РНК.
3. За време на операцијата се внесува RNase или не се носат ракавици за еднократна употреба, маски итн.
Препорака: Експериментите за екстракција на РНК најдобро се изведуваат во посебни простории за манипулација со РНК и табелата се брише пред експериментот.
Носете ракавици и маски за еднократна употреба за време на експериментот за да ја минимизирате деградацијата на РНК предизвикана од воведувањето на RNase.
4. Реагенсите се контаминирани со RNase за време на употребата.
Препорака: Заменете го со нов комплет за изолација на тотална РНК на животните за поврзани експерименти.
5. Цевките за центрифугирање, врвовите итн. што се користат при манипулација со РНК се контаминирани со RNase.
Препорака: Потврдете дека цевките за центрифуга, врвовите, пипетите итн. што се користат при екстракција на РНК се без RNase.
Прочистената добиена РНК влијае на низводните експерименти
РНК прочистена од колоната за прочистување, ако сол јони, содржината на протеини е премногу голема ќе влијае на низводно експеримент, како што се: обратна транскрипција, Северен Блот et al.
1. Елуираната РНК има остатоци од сол јони.
Препорака: Потврдете дека точниот волумен на етанол е додаден во баферот RW2 и изведете 2 миење на колоната за прочистување со центрифугалната брзина назначена за работа;ако има остатоци од јонски сол, оставете ја колоната за прочистување во пуфер RW2 5 минути на собна температура и направете центрифугирање за да се максимизира отстранувањето на контаминацијата со сол.
2. Остаток од етанол во елуирана РНК.
Препорака: Потврдете дека по миењето со бафер RW2, извршете ја операцијата на центрифугирање на празна цевка со брзината на центрифугирање наведена за работа, зголемете го времето на операцијата на центрифугирање на празна цевка на 2 минути ако сè уште има остатоци од етанол или оставете го на собна температура 5 m.
