Водич за анализа на проблеми

Следнава анализа на проблемите со кои може да се сретнетеВкупно растенијаRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Колоната за центрифугирање е затнат

Блокирањето на спин колоната ќе предизвика намалување на приносот на РНК или дури и неможност да се прочисти за да се добие РНК, а квалитетот на добиената РНК ќе биде низок.

Анализа на вообичаени причини:

1. Примерокот не е целосно скршен.

Нецелосната фрагментација на примерокот може да ја блокира колоната за чистење на ДНК, што исто така може да влијае на приносот и квалитетот на РНК.Препорачуваме кога се врши фрагментација на примерокот, брзо да се меле во доволна количина течен азот за да се скршат ткивата како што се клеточните ѕидови и клеточните мембрани на примероците што е можно повеќе.За растителни примероци на полифенолни полисахариди, ви препорачуваме да користите Комплет за изолација на растителна тотална РНК плус.

2. Аспирирајте го изолираниот супернатант од колоната за чистење на ДНК, аспирирајте го можниот пелети од клеточен отпад.

Аспирираните пелети од клеточни остатоци може да ја затнат колоната само со РНК за време на процедурите за адсорпција на РНК (видете чекор 5 од постапката, чекор 6 од постапката полисахарид полифенол).Препорачуваме да се внимава при аспирација на овој супернатант за да се избегне аспирација на клеточни остатоци.

3. Почетната количина на примерок е преголема.

Прекумерната употреба на примерокот ќе резултира со нецелосна фрагментација на примерокот или нецелосна лиза на клетките со бафер PRL1 или пуфер PSL1, што ќе резултира со затнат колона за прочистување за операциите на прочистување.Комплетот за изолација на тотална РНК на растенијата има почетен максимум од 50 mg по еднократно прочистување на оперираниот примерок.За растителни примероци од полифенолни полисахариди, ви препорачуваме да го пробате комплетот за изолација на растителна тотална РНК Плус.

4. Температурата на центрифугата е премногу ниска.

Изолација и прочистување на целата РНК, освен за нарушување на ткивото на примерокот со течен азот, сите чекори се изведуваат на собна температура (20-25 °C).Некои центрифуги со ниски температури имаат температури под 20 °C, што може да предизвика блокади на колоната за чистење на ДНК и/или колоната само за РНК.Ако тоа се случи, поставете ја температурата на центрифугата на 20-25 °C и претходно загрејте ја смесата за лиза и/или додавање на супернатантот за сепарација на етанол на 37 °C.

Не се екстрахира РНК или приносот на РНК е низок

Обично има многу фактори кои влијаат на ефикасноста на обновувањето, како што се: содржината на РНК на примерокот, методот на работа, волуменот на елуцијата итн.

Анализа на вообичаени причини како што следува:

1. За време на операцијата беше извршена ледена бања или центрифугирање на ниска температура (4°C).

Предлог: Работете на собна температура (15-25°C) во целиот процес, не правете ледена бања и центрифугирање на ниски температури.

       2.РНК е деградирана поради неправилно зачувување на примерокот или долгорочно зачувување на примерокот.

Препорака: Свежо собраните примероци треба брзо да се замрзнат во течен азот, а потоа да се чуваат на -80°C долго време, да се избегнува повторното замрзнување и одмрзнување на примероците;или веднаш натопете ги примероците во РНК стабилизатор RNA полатер раствор (примероци од животни).

       3.Недоволната фрагментација и лиза на примерокот доведува до блокирање на колоната за прочистување.

Предлог: Кога го мелете ткивото, проверете дали ткивото е доволно сомелено и брзо префрлете го во претходно подготвениот пуфер PSL1 (потврдете дека е додаден правилниот дел од β-ME, видете го чекор 1 од постапката).

4. Елуентот е погрешно додаден.

Предлог: Проверете дали ddH без RNase₂О се капе во средината на мембраната на колоната за прочистување.

5. Точниот волумен на апсолутен етанол не беше додаден во пуфер PSL2 или пуфер PRW2.

Предлог: Ве молиме следете ги упатствата, додајте го точниот волумен на апсолутен етанол во Buffer PSL2 и Buffer PRW2 и добро измешајте пред да се користи комплетот.

6. Количината на примерок од ткиво е несоодветна.

Предлог: Користете 50 mg ткиво на 500 μl пуфер PSL1.Користењето на премногу ткиво ќе ја намали количината на извлечена РНК и ќе се намали и чистотата на добиената РНК.Силно препорачуваме почетната доза на примерок да не надминува 50 mg по операција за екстракција на РНК.

7. Несоодветен волумен на елуирање или нецелосно елуирање.

Предлог: Волуменот на елуентот на колоната за прочистување е 50-200 μl;ако ефектот на елуција не е задоволителен, се препорачува да се продолжи времето на собна температура по додавање на претходно загреан ddH без RNase₂О, како на пример 5-10 мин.

8. Колоната за прочистување има остатоци од етанол по миењето со пуфер PRW2.

   Предлог: Ако празната епрувета се центрифугира 1 мин и останува уште етанол по миењето во пуфер PRW2, можете да го зголемите времето на центрифугирање на празната цевка на 2 минути или да ја ставите колоната за прочистување на собна температура 5 минути за целосно да го отстраните преостанатиот етанол.

9. Комплетот е користен погрешно.

   Предлог: За растителни примероци на полифенолни полисахариди, со користење на вообичаени комплети како што е комплетот за изолација на тотална РНК на растенијата можеби нема да може да се добијат идеални примероци на РНК.Ви препорачуваме да го користите Plant Total RNA IsolationKit Plus, кој е специјално дизајниран за примероци од растителни полифенолни полисахариди.Комплет специјално развиен за екстракција на РНК од растителни примероци од полифенол и полисахариди.

Вредноста на OD260/OD280 е ниска

Елуција на РНК со ddH₂O и се користи за отчитување на спектрофотометарот резултира со ниски вредности на OD260/OD280.Препорачуваме користење 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (наместо ddH без RNase₂O за елуирање на РНК) за да се добијат релативно точни вредности на OD260/OD280, видете „Асеси за концентрација и прочистување на РНК“ на страница 19.

Прочистената РНК се разградува

Квалитетот на прочистената РНК е поврзан со фактори како што се зачувување на примерокот, контаминација со RNase и манипулација.

Анализа на вообичаени причини:

1. Примероците од ткивото не беа складирани навреме по собирањето.

    Препорака: Ако примероците од ткивото не се искористат навреме по собирањето, ве молиме чувајте ги во течен азот на ниска температура веднаш или префрлете ги на -80°C за долгорочно складирање по брзо замрзнување во течен азот, или веднаш потопете ги примероците во раствор од РНК стабилизатор RNA полатер (животински примероци ).За екстракција на РНК, обидете се да користите свежо собрани примероци од ткиво.

2.Повторено замрзнување и одмрзнување на примероци од ткиво.

   Предлог: При складирање на примероци од ткиво, најдобро е да се исечат на мали парчиња за конзервирање, а дел од нив да се извади кога се користат за да се избегне разградување на РНК предизвикано од повеќекратно замрзнување и одмрзнување на примероците.

3.RNase се внесува во операционата сала или не се носат ракавици за еднократна употреба, маски итн.

   Предлог: Експериментите за екстракција на РНК најдобро се изведуваат во посебни операции со РНК, а лабораториската маса треба да се исчисти пред експериментот, а за време на експериментот треба да се носат ракавици и маски за еднократна употреба за да се избегне деградација на РНК предизвикана од воведувањето на РНаза во најголема мера.

4. Реагенсот е контаминиран со RNase за време на употребата.

   Предлог: Заменете со нова серија комплети за екстракција на вкупна РНК на растенијата за поврзани експерименти.

5. Цевките за центрифугирање и врвовите на пипетите што се користат за манипулација со РНК се контаминирани со RNase.

Предлог: Осигурете се дека цевките за центрифуга, врвовите на пипетите, пипетите итн. што се користат при екстракција на РНК се без RNase.

Упатства за употреба:

Прирачник за упатство за комплет за изолација на растителна РНК