Нема сигнали за засилување

1. Taq DNA полимеразата во комплетот ја губи својата активност поради неправилно складирање или истекување на комплетот.
Препорака: Потврдете ги условите за складирање на комплетот;повторно додадете соодветна количина на Taq DNA полимераза во PCR системот или купете нов комплет за PCR во реално време за поврзани експерименти.

2. Има многу инхибитори на Taq DNA полимеразата во шаблонот на ДНК.
Предлог: Повторно прочистете го шаблонот или намалете ја количината на употребениот шаблон.

3. Концентрацијата на Mg2+ не е соодветна.
Препорака: Концентрацијата на Mg2+ на 2× Real PCR Mix што ја даваме е 3,5 mM.Сепак, за некои специјални прајмери ​​и шаблони, концентрацијата на Mg2+ може да биде поголема.Затоа, можете директно да додадете MgCl2 за да ја оптимизирате концентрацијата на Mg2+.Се препорачува да се зголемува Mg2+ 0,5mM секој пат за оптимизација.

4. Условите за засилување на PCR не се соодветни, а секвенцата или концентрацијата на прајмерот е несоодветна.
Предлог: потврдете ја исправноста на прајмерната секвенца и прајмерот не е деградиран;ако сигналот за засилување не е добар, обидете се да ја намалите температурата на жарење и соодветно да ја прилагодите концентрацијата на прајмерот.

5. Износот на шаблонот е премал или премногу.
Препорака: Изведете разредување на градиентот за линеаризација на шаблонот и изберете ја концентрацијата на шаблонот со најдобар PCR ефект за експериментот со PCR во реално време.

NTC има превисока флуоресцентна вредност

1. Контаминација со реагенс предизвикана за време на работата.
Препорака: Заменете со нови реагенси за експерименти со PCR во реално време.

2. Контаминација настана за време на подготовката на системот за реакција на PCR.
Препорака: Преземете ги неопходните заштитни мерки за време на работата, како што се: носење латекс ракавици, користење на врв од пипета со филтер итн.

3. Прајмерите се деградирани, а деградацијата на прајмерите ќе предизвика неспецифично засилување.
Предлог: Користете SDS-PAGE електрофореза за да откриете дали прајмерите се деградирани и заменете ги со нови прајмери ​​за експерименти со PCR во реално време.

Димер на прајмер или неспецифично засилување

1. Концентрацијата на Mg2+ не е соодветна.
Препорака: Концентрацијата на Mg2+ на 2× Real PCR EasyTM Mix што ја даваме е 3,5 mM.Сепак, за некои специјални прајмери ​​и шаблони, концентрацијата на Mg2+ може да биде поголема.Затоа, можете директно да додадете MgCl2 за да ја оптимизирате концентрацијата на Mg2+.Се препорачува да се зголемува Mg2+ 0,5mM секој пат за оптимизација.

2. Температурата на жарење со PCR е премногу ниска.
Предлог: Зголемете ја температурата на жарење на PCR за 1℃ или 2℃ секој пат.

3. Производот на PCR е премногу долг.
Препорака: Должината на производот PCR во реално време треба да биде помеѓу 100-150bp, не повеќе од 500bp.

4. Прајмерите се деградирани, а деградацијата на прајмерите ќе доведе до појава на специфично засилување.
Предлог: Користете SDS-PAGE електрофореза за да откриете дали прајмерите се деградирани и заменете ги со нови прајмери ​​за експерименти со PCR во реално време.

5.ПЦР системот е несоодветен или системот е премал.
Предлог: Системот за реакција на PCR е премногу мал и ќе предизвика намалување на точноста на детекцијата.Најдобро е да се користи системот за реакција препорачан од квантитативниот PCR инструмент за повторно да се изврши експериментот со PCR во реално време.

Слаба повторливост на квантитативните вредности

1. Инструментот не функционира.
Предлог: Може да има грешки помеѓу секоја PCR дупка на инструментот, што ќе резултира со слаба репродуктивност за време на управувањето со температурата или откривањето.Ве молиме проверете според упатствата на соодветниот инструмент.

2. Чистотата на примерокот не е добра.
Препорака: Нечистите примероци ќе доведат до слаба репродуктивност на експериментот, што ја вклучува чистотата на шаблонот и прајмерите.Најдобро е да се пречисти шаблонот, а прајмерите најдобро се прочистуваат со SDS-PAGE.

3. Времето за подготовка и складирање на системот PCR е премногу долго.
Предлог: Користете го системот за PCR во реално време за ПЦР експеримент веднаш по подготовката и не оставајте го настрана премногу долго.

4. Условите за засилување на PCR не се соодветни, а секвенцата или концентрацијата на прајмерот е несоодветна.
Предлог: потврдете ја исправноста на прајмерната секвенца и прајмерот не е деградиран;ако сигналот за засилување не е добар, обидете се да ја намалите температурата на жарење и соодветно да ја прилагодите концентрацијата на прајмерот.

5.ПЦР системот е несоодветен или системот е премал.
Предлог: Системот за реакција на PCR е премногу мал и ќе предизвика намалување на точноста на детекцијата.Најдобро е да се користи системот за реакција препорачан од квантитативниот PCR инструмент за повторно да се изврши експериментот со PCR во реално време.