Директен RT-qPCR комплет III
Опис на комплет:
◮Директен комплет RT-qPCR, кој користи Foreasy Reverse Transcriptase и Foreasy HS Taq DNA Polymerase развиени од Foregene, со уникатен реакционен пуфер, го прави овој комплет со силна отпорност и компатибилност и може директно да ја тестира реакцијата користејќи го Foregene Lysis системот како шаблон.Овој комплет може да се примени за комплет за откривање нуклеинска киселина COVID-19 и други патогени бактерии за развој на комплет за откривање нуклеинска киселина.
Опис
Комплетот Direct RT-qPCR обезбедува посебно спакуван RT-qPCR пуфер (со мешана Foreasy HS Taq DNA полимераза) и високо ефикасенForeasy обратна транскриптаза (MMLV),што го прави погодно за создавање комплети за задни делови и прилагодување на системот, во рамките на едноставната верификација.
Директен комплет RT-qPCR, кој користи Foreasy Reverse Transcriptase и Foreasy HS Taq DNA Polymerase развиени од Foregene, со уникатен реакционен пуфер, го прави овој комплет со силна отпорност и компатибилност и може директно да ја тестира реакцијата користејќи го Foregene Lysis системот како шаблон.Овој комплет може да се примени за комплет за откривање нуклеинска киселина COVID-19 и други патогени бактерии за развој на комплет за откривање нуклеинска киселина.
Овој комплет може директно да биде компонента на IVD производот, користејќи лесно и брзо.Потребна е само лесна проверка, без да се развива повторно.
Спецификации
500 Т, 50 000 Т
Компоненти на комплетот
| Содржина на комплетот (20 μL систем за реакција) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 Т | 50.000 Т | |
| Форизи Реверска транскриптаза(200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 мл× 5 |
| 2× Директен qPCRМикс-Такман | 1 ml × 5 | 500 мл× 1 |
| Упатство | 1 | 1 |
Оперативни чекори
О: Подгответе го шаблонот и реагенсот
1. Подгответе го подготвен шаблон за РНК (Се препорачува да се користи сериски комплет Foregene Total RNA Isolation Kit за екстракција и прочистување на шаблонот за РНК) или производ за пукање примерок (Се препорачува да се користи системот Foregene Lysis), специфични прајмери (10 μM) и други релевантни потрошни материјали, инструмент.
2. Ставете го 2× Direct RT-qPCR пуферот, ddH2O без RNase и 20× ROX референтната боја (ако е потребно) во кутија со мраз, правејќи ги тие да се стопат природно и нежно измешајте.
Б: Подгответе го системот RT-qPCR
Добијте половина од волуменот на реакциониот пуфер на реакциониот систем (на пример, ако волуменот на системот е 20 μL, треба да добие 10 μL 2× Директен RT-qPCR пуфер). Засоодветна количина на ензим, го предлагаме тоаM-MLV: 10-30 U/20 μL систем за реакција,ТакДНК полимераза:1-2 U/20 μL систем за реакцијаова е наш предлог, треба да го тестирате и прилагодите), додадете шаблон РНК, специфични прајмери и сонди и додадете ddH без RNase2О до 20 μL.Специфичната подготовка на системот за реакција RT-qPCR може да се наведе во следната табела 1.
Табела 1: Подгответе RT-qPCR систем
| Компонента | Волумен | Конечна концентрација |
| 2× Директен RT-qPCR бафер | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA полимераза | 1-2 У | |
| Напреден прајмер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Обратен прајмер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Сонда (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Шаблон (РНК или лизат) | X μL | |
| 20× ROX референтна боја | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Вкупен волумен | 20 μL |
Забелешка: Forward Primer и Reverse Primer се специфични прајмери на целниот ген.Системот на qPCR може да се прилагоди според практични експериментални и PCR модели.Препорачуваме 400nM за конечна концентрација на повеќето прајмери.Прилагодете го волуменот на специфичните прајмери и сонди според подготвената концентрација и препорачаната конечна концентрација, ве молиме.
1*: Изберете соодветна конечна концентрација на ROX референтна боја според различни квантитативни PCR инструменти.Оптималната концентрација на референтна боја ROX на вообичаените квантитативни PCR инструменти е прикажана во следната табела:
| Квантитативни PCR инструменти | Конечна концентрација на референтна боја ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Чекор прв,итн. | 1× (на пример, додадете 1μl 20×ROX референтна боја во систем за реакција од 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P и Mx4000, итн. | 0,5× (на пример, додадете 0,5μl 20×ROX референтна боја во реакционен систем од 20 μL) |
| Roche PCR инструмент, Bio-Rad PCR инструмент, Eppendorf квантитативен PCR инструмент итн. | Без референтна боја ROX |
Складирање и рок на траење
Комплетот треба да се чува на -20 ± 5℃.Веднаш да се чува во термостатски фрижидер -20℃.Периодот на важност е 2 години доколку се чува во соодветна состојба.
