Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready со еден чекор qRT-PCR комплети сонда
Описи
Овој производ користи уникатен пуфер систем за лиза за брзо ослободување на РНК од примероци од култивирани клетки за RT-qPCR реакции, елиминирајќи го процесот на прочистување на РНК кој одзема многу време и макотрпен, и само 7 минути за да се добие потребната РНК шаблон, со 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman може брзо и ефикасно да се добијат резултати од kPCR.
5× Direct RT Mix и 2× Direct qPCR Mix-Taqman имаат силна толеранција на инхибитор и може да изврши ефикасно превртување и специфично засилување користејќи го лизатот на примерокот што треба да се мери како шаблон.Реагенсот содржи Foregene реверзна транскриптаза, топла D-Taq ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2, Реакција пуфер, PCR оптимизатор и стабилизатор, кој може да се користи со тампон за лиза за брзо и лесно откривање примероци и има карактеристики на висока чувствителност, специфичност и стабилност.
Спецификации
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Компоненти на комплетот
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Компоненти на комплетот 20μl qPCR систем за реакција | DRT-01021 | DRT-01022 | Забелешка | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Дел I | Пуфер CL | 4 ml | 20 мл | Лиза на клетките |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Тампон ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Дел II | ДНК Бришач | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX референтна боја | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH без RNase2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Упатство за употреба | 1 парче | 1 парче | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman може да се купи одделно
Карактеристики и предности
■Едноставно и ефективно: со Cell Direct RT технологијата, примероците на РНК може да се добијат за само 7 минути.
■ Побарувачката за примерок е мала, може да се тестираат дури 10 ќелии.
■ Висока пропусност: може брзо да открие РНК во клетките култивирани во плочи со 384, 96, 24, 12, 6 бунари.
■ ДНК Бришачот може брзо да ги отстрани ослободените геноми, во голема мера да го намали влијанието врз последователните експериментални резултати.
■ Оптимизираниот RT и qPCR систем ја прави двостепената RT-PCR реверзна транскрипција поефикасна и PCR поконкретна и поотпорна на инхибиторите на RT-qPCR реакцијата.
Апликација за комплет
Опсег на примена: култивирани клетки.
- РНК ослободена со лиза на примерокот: се применува само за шаблонот RT-qPCR на овој комплет.
- Комплетот може да се користи за следните цели: анализа на генска експресија, верификација на ефектот на замолчување на генот посредуван од siRNA, скрининг на лекови итн.
Складирање и рок на траење
I дел од овој комплет треба да се чува на 4℃;Дел II треба да се чува на -20℃.
Foregene Protease Plus II треба да се чува на 4℃, не замрзнувајте на -20℃.
Реагенс 2×Direct qPCR Mix-Taqman треба да се чува на -20℃во темница;ако често се користи, може да се чува и на 4℃ за краткорочно складирање (искористување во рок од 10 дена).
Принципи за дизајнирање на прајмер за PCR во реално време
Напреден прајмер и обратен прајмер
За Real Time PCR, дизајнот на прајмерот е многу важен.Прајмерите се поврзани со специфичноста и ефикасноста на засилувањето на PCR и може да се дизајнираат со повикување на следните принципи:
- Должина на прајмер: 18-30bp.
- Содржина на GC: 40-60%.
- Tm вредност: Софтверот за дизајн на Primer, како што е Primer 5, може да ја даде вредноста Tm на прајмерот.Вредностите на Tm на прајмерите нагоре и низводно треба да бидат што е можно поблиску.Може да се користи и формулата за пресметка на Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Кога се изведува PCR, како температура на жарење генерално се избира температура под вредноста на Tm на прајмерот од 5 °C (соодветното зголемување на температурата на жарење може да ја зголеми специфичноста на PCR реакцијата).
- Прајмери и PCR производи:
- Должината на производот за засилување PCR за дизајн на прајмер е по можност 100-150bp.
- Дизајнерските прајмери во секундарната структура на шаблонот треба да се избегнуваат колку што е можно повеќе.
- Избегнувајте формирање на 2 или повеќе комплементарни основи помеѓу 3' краевите на прајмерите нагоре и низводно.
- Терминалната основа на Primer 3' не може да биде присутна со 3 дополнителни последователни G или C.
- Самите прајмери не можат да имаат комплементарни структури, инаку ќе се формира структура на фиба, што ќе влијае на засилувањето на PCR.
- ATCG треба да се дистрибуира што е можно подеднакво во прајмерната секвенца, а 3' терминалната база треба да се избегнува како Т.
Додаток1: Cell ДиректенRT-qPCR Компонен за комплетт пакет со додатоци
1. Раствор за лиза на клетки
| Раствор за лиза на клетки | |||
| Компоненти на комплетот (24-бунарски систем за лиза / бунар) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ДелЈас | Пуфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Тампон ST | 1 ml × 2 | 10 мл | |
| ДелII | ДНК Бришач | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Микс | |
| Компоненти на комплетот (20 μl систем за реакција) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Директна RT мешавина | 800 μl |
| ddH без RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Мешавина | ||
| Компоненти на комплетот (20 μl систем за реакција) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Директен qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX референтна боја | 40 μl | 200 μl |
| ddH без RNase2O | 1,7 мл | 10 мл |
Упатства за употреба:
