Комплет QuickEasy Cell Direct RT-qPCR (96 бунари) – SYBR Green I
Описи
На(96-добро) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR комплет-SYBR Грин Iобезбедувауникатен тампон систем за лизаto брзо ослободува РНКод култивирана клеткапримероци за RT-qPCR реакции, елиминирајќи ги одземаат многу време и макотрпниПроцес на прочистување на РНК и потребни се само 7 минути за да се добие потребната шаблон за РНК.На5× Директна RT мешавинаи2× Директен qPCR Mix-SYBRпредвидени во кутијата може брзо иефикасно добиваат квантитативни во реално времеРезултати од PCR.
5× Direct RT Mix и 2× Direct qPCR Mix-SYBR имаат силна толеранција на инхибитор и можат да го користат лизатот на примерокот што треба да се тестира како образец за ефикасна обратна транскрипција и специфично засилување.Реагенсот содржи Foregene единствена реверзна транскриптаза со висок афинитет за РНК, како и топла D-Taq ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2 , пуфер за реакција, PCR оптимизатор и стабилизатор, и може да се користи заедно со тампон за лиза за брзо, лесно и прецизно откривање на примерокот и има карактеристики на висока чувствителност, силна специфичност и добра стабилност.
Комплетот е наменет за микросистемска лиза на култивирани клетки од 96 добро, и има добра униформност и конзистентност;компонентите на комплетот обезбедуваат 96 реакции на лиза, 96 реакции на обратна транскрипција и 96×2 qPCR реакции, кои можат да ја задоволат плочата со ќелии со 96 бунари за еднократна употреба, избегнувајќи го загадувањето предизвикано од повеќекратно отворање, замрзнување и одмрзнување на реагенсите и деградација на перформансите на реагенсот.
Компоненти на комплетот
| Состав на комплет ( 50 μL lysis систем/20 μLRT систем за реакција /20μСистем за реакција L qPCR) | ДРТ-03011 | Забелешка | |
| 96Т | |||
| ДелI | ТампонCL | 5 ml | ЌелијаЛиза |
| ForegeneПротеаза Плус II | 100 μL | ||
| ТампонST | 500 μL | ||
| Дел II | ДНКБришач | 100 μL | |
| 5× Директна RT мешавина | 400 μL | RT | |
| 2× Директна qPCR мешавина-SYBR | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX референтна боја | 400µL | ||
| RNase- БесплатноddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mгодишен | 1 парче | 1 порција | |
*: Реагенсот за лиза ДНК Бришачот е вклучен во Дел II од комплетот;Компонентите Cell Lysis, RT и qPCR може да се купат одделно.
Карактеристики и предности
■Едноставно и ефективно: со Cell Direct RT технологијата, примероците на РНК може да се добијат за само 7 минути.
■ Побарувачката за примерок е мала, може да се тестираат дури 10 ќелии.
■ Висока пропусност: може брзо да открие РНК во клетките култивирани во плочи со 384, 96, 24, 12, 6 бунари.
■ ДНК Бришачот може брзо да ги отстрани ослободените геноми, во голема мера да го намали влијанието врз последователните експериментални резултати.
■ Оптимизираниот RT и qPCR систем ја прави двостепената RT-PCR реверзна транскрипција поефикасна и PCR поконкретна и поотпорна на инхибиторите на RT-qPCR реакцијата.
Апликација за комплет
Опсег на примена: култивирани клетки.
- РНК ослободена со лиза на примерокот: се применува само за шаблонот RT-qPCR на овој комплет.
- Комплетот може да се користи за следните цели: анализа на генска експресија, верификација на ефектот на замолчување на генот посредуван од siRNA, скрининг на лекови итн.
Складирање и рок на траење
I дел од овој комплет треба да се чува на 4℃;Дел II треба да се чува на -20℃.
Foregene Protease Plus II треба да се чува на 4℃, не замрзнувајте на -20℃.
Реагенс 2×Direct qPCR Mix-Taqman треба да се чува на -20℃во темница;ако често се користи, може да се чува и на 4℃ за краткорочно складирање (искористување во рок од 10 дена).
Принципи за дизајнирање на прајмер за PCR во реално време
Напреден прајмер и обратен прајмер
За Real Time PCR, дизајнот на прајмерот е многу важен.Прајмерите се поврзани со специфичноста и ефикасноста на засилувањето на PCR и може да се дизајнираат со повикување на следните принципи:
- Должина на прајмер: 18-30bp.
- Содржина на GC: 40-60%.
- Tm вредност: Софтверот за дизајн на Primer, како што е Primer 5, може да ја даде вредноста Tm на прајмерот.Вредностите на Tm на прајмерите нагоре и низводно треба да бидат што е можно поблиску.Може да се користи и формулата за пресметка на Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Кога се изведува PCR, како температура на жарење генерално се избира температура под вредноста на Tm на прајмерот од 5 °C (соодветното зголемување на температурата на жарење може да ја зголеми специфичноста на PCR реакцијата).
- Прајмери и PCR производи:
- Должината на производот за засилување PCR за дизајн на прајмер е по можност 100-150bp.
- Дизајнерските прајмери во секундарната структура на шаблонот треба да се избегнуваат колку што е можно повеќе.
- Избегнувајте формирање на 2 или повеќе комплементарни основи помеѓу 3' краевите на прајмерите нагоре и низводно.
- Терминалната основа на Primer 3' не може да биде присутна со 3 дополнителни последователни G или C.
- Самите прајмери не можат да имаат комплементарни структури, инаку ќе се формира структура на фиба, што ќе влијае на засилувањето на PCR.
- ATCG треба да се дистрибуира што е можно подеднакво во прајмерната секвенца, а 3' терминалната база треба да се избегнува како Т.
Додаток1: Cell ДиректенRT-qPCR Компонен за комплетт пакет со додатоци
1. Раствор за лиза на клетки
| Раствор за лиза на клетки | |||
| Компоненти на комплетот (24-бунарски систем за лиза / бунар) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ДелЈас | Пуфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Тампон ST | 1 ml × 2 | 10 мл | |
| ДелII | ДНК Бришач | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Микс | |
| Компоненти на комплетот (20 μl систем за реакција) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5× Директна RT мешавина | 800 μl |
| ddH без RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Мешавина | ||
| Компоненти на комплетот (20 μl систем за реакција) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Директен qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX референтна боја | 40 μl | 200 μl |
| ddH без RNase2O | 1,7 мл | 10 мл |
Упатства за употреба:
