Водич за анализа на проблеми

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Низок принос или без ДНК

Обично има многу фактори кои влијаат на приносот на геномната ДНК, вклучувајќи го изворот на примерокот, возраста на примерокот, условите за складирање на примерокот и операцијата.

Геномската ДНК не можеше да се добие при екстракција

1. Примероците од ткиво се неправилно складирани или складирани премногу долго, што резултира со деградација на геномната ДНК.

Препорака: Чувајте ги примероците од ткиво во течен азот или -20°C;обидете се да користите новособрани примероци за екстракција на геномска ДНК.

2. Премалата количина на примерок може да предизвика да не се екстрахира соодветната геномска ДНК.

Предлог: За примероци од ткиво кои се складирани долго време или имаат тешка деградација на геномната ДНК, количината на примероци од ткиво може соодветно да се зголеми за да се извлече значителна геномска ДНК.Количината на примерокот може да се одреди според потребите на ДНК, но свежиот примерок не треба да надминува 100 mg, а сувиот примерок не треба да надминува 30 mg.

3. Примерокот не се меле со течен азот или не се става предолго по течен азот.

Предлог: При екстракција на ДНК, примерокот треба целосно да се меле со течен азот за да се скрши клеточниот ѕид;по мелењето, префрлете го примерокот во прав во PL1 претходно загреан на 65°C што е можно поскоро (штом мелениот прав ќе се стопи, геномската ДНК ќе почне брзо да се разградува) .

4. Неправилното складирање на Foregene Protease резултира со намалена или инактивирана активност.

Препорака: Потврдете ги условите за складирање на Foregene Protease или заменете ја со нова Foregene Protease за ензимска хидролиза.

5. Комплетот е неправилно складиран или складиран предолго, што предизвикува откажување на некои компоненти во комплетот.

Препорака: Купете нов комплет за екстракција на геномска ДНК од растенија за поврзани операции.

6. Неправилна употреба на комплетот.

Предлог: Купете комплет за изолација на ДНК на растенијата посветен на примероци за екстракција и прочистување на геномната ДНК на растенијата.

7. Баферирајте го WB без додавање aневоден етанол.

Препорака: Погрижете се да го додадете точниот волумен на апсолутен етанол во Buffer WB.

8. Елуентот не се капеше правилно на силика мембраната.

Предлог: Додадете го претходно загреаниот елуент на 65℃по капка до средината на мембраната со силика гел и оставете ја на собна температура 5 минути за да ја зголемите ефикасноста на елуцијата.

Екстракција за да се добие геномска ДНК со низок принос

1. Примерокот е неправилно складиран или складиран премногу долго, што резултира со деградација на геномската ДНК.

Препорака: Чувајте ги примероците од ткиво на -20℃;обидете се да користите новособрани примероци од ткиво за екстракција на геномска ДНК.

2. Ако количината на примероци од ткиво е премала, извлечената геномска ДНК ќе биде помала.

Предлог: Некои примероци од растенија се богати со вода, како што се водни растенија како алги и сл., дозата може соодветно да се зголеми или водата да се дехидрира малку пред операцијата.

3. Примероците не беа темелно мелени со течен азот или беа оставени на собна температура предолго по мелењето.

Предлог: Мелењето со течен азот мора да биде доволно, а клеточниот ѕид на примерокот треба да се скрши колку што е можно повеќе;веднаш по мелењето, примерокот во прав треба да се префрли на 65℃претходно загреан тампон PL1 за следниот чекор.

4. Некористење на правилниот комплет.

Препорака: Користете посебен комплет за изолација на ДНК на растенијата за екстракција и прочистување на геномната ДНК на растенијата.

5. Неправилното складирање на Foregene Protease резултира со намалена или инактивирана активност.

Препорака: Потврдете ги условите за складирање на Foregene Protease или заменете ја со нова Foregene Protease за ензимска хидролиза.

6. Проблем со елуент

Препорака: Ве молиме користете пуфер EB за елуција;ако се користи ddH₂O или други елуенти, проверете дали pH на елуентот е помеѓу 7,0-8,5.

7. Елуентот не се капе правилно

Предлог: Ве молиме додадете ја капката за елуирање на средината на силициумската мембрана и оставете ја на собна температура 5 минути за да ја зголемите ефикасноста на елуцијата.

8. Волуменот на елуентот е премал

Предлог: Ве молиме користете го елуентот за елуција на геномска ДНК според упатствата, барем не помалку од 100μl.

Извлечена геномска ДНК со мала чистота

Ниската чистота на геномната ДНК ќе доведе до неуспех или слаб ефект на низводните експерименти, како што се: ензимот не може да се исече, а целниот генски фрагмент не може да се добие со PCR.

1. Разни протеинска контаминација, контаминација со РНК.

Анализа: тампон PW не се користеше за миење на колоната;Пуфер PW не се користеше за миење на колоната со правилна брзина на центрифугирање.

Предлог: обидете се да се осигурате дека нема врнежи во супернатантот кога супернатантот се поминува низ колоната;не заборавајте да ја измиете колоната за прочистување со Buffer PW според упатствата и овој чекор не може да се изостави.

2. Загадување со нечистотии со јони.

Анализа: Колоната за миење Buffer WB беше испуштена или беше измиена само еднаш, што резултираше со преостаната јонска контаминација.

Препорака: Погрижете се да се измие двапати со Buffer WB во согласност со упатствата за да се отстранат преостанатите јони колку што е можно повеќе.

3. Контаминација со RNase.

Анализа: Егзогена RNase се додава во пуферот;неправилната операција на миење во Buffer PW ќе резултира со резидуална RN-аза и ќе влијае на низводните експериментални операции на РНК, како што е ин витро транскрипцијата.

Предлог: Комплетовите за екстракција на нуклеинска киселина од серијата Foregene може да ја отстранат РНК без дополнителна RNase, а на сите реагенси во комплетот за изолација на ДНК на растенијата не им е потребна RNase;не заборавајте да ја измиете колоната за прочистување со Buffer PW според упатствата и овој чекор не може да се изостави.

4. Остатоци од етанол.

Анализа: По миењето на колоната за прочистување со пуфер WB, не беше извршена центрифугирање со празна цевка.

Препорака: Следете ги упатствата за правилно центрифугирање на празна цевка.

Упатство за употреба:

Прирачник за инструкции за комплет за изолација на растителна ДНК