Нискиот сооднос на A260/A230 обично е предизвикан од нечистотии со максимална апсорпциона бранова должина на 230 nm.Ајде да видиме што вклучуваат овие нечистотии:

• Вообичаени загадувачи	Бранова должина на апсорпција	Ефект на сооднос
  Протеини	~ 230 nm и 280 nm	Истовремено намалување на А260/A 280и А260/A 280соодноси
  Гванидин сол	220-240 nm	Намалете го А260/A 280сооднос
  Фенол	~ 270 nm	-
  Тризол	~ 230 nm и 270 nm	Намалете го А260/A 280сооднос
  EDTA	~ 230 nm	Намалете го А260/A 280сооднос
  Етанол	230-240 nm	Намалете го А260/A 280сооднос

 
 
 
Апсорпциона бранова должина и вредност на контраст на вообичаените загадувачи

Pконтаминација со ротеин
Загадувањето со протеини може да се смета за најчестото загадување во процесот на екстракција на нуклеинска киселина.Протеинот постои помеѓу горната и долната водена фазаорганскифаза .Загадувањето ќе го намали односот на A260/A280 и A260/A230 во исто време, а односот A260/A230 ќе се промени поочигледно од односот A260/A280.
Во текот на следнитеобратна транскрипцијаor qPCR реакции, протеинските остатоци може да ја инхибираат или да ја попречат функцијата на ензимот.Најдобар начин да се избегне контаминација со протеини е да се има на ум принципот „наместо помалку отколку повеќе, мала количина многу пати“ при аспирација на супернатантот.

2. Загадување со гванидиниум
хидрохлоридот (GuHCl) и гванидин тиоцијанат (GTC) имаат ефект на денатурирање на протеините, кои можат брзо да ги уништат клеточните мембрани за време на процесот на екстракција на нуклеинската киселина, предизвикувајќи денатурација на протеините и таложење.Брановата должина на апсорпцијата на GuHCl и GTC е помеѓу 220-240 nm, апреостанатата сол на гванидиниум ќе го намали односот на A260/A230.Иако преостанатата сол на гванидиниум ќе го намали односот,влијанието врз низводните експерименти е всушност занемарливо.

3. Контаминација со тризол
Главната компонента на Тризол е фенолот.Главната функција на фенолот е да ги лизира клетките и да ослободува протеини и супстанции од нуклеинска киселина во клетките.Иако фенолот може ефикасно да ги денатурира протеините, тој не може целосно да ја инхибира активноста на RNase.Затоа, 8-хидроксикинолин, гванидин изотиоцијанат, β-меркаптоетанол итн. се додаваат во TRIzol за да се инхибираат ендогени и егзогени RNase.
При екстракција на клеточна РНК, Тризол може брзо да ги лизира клетките и да ја инхибира нуклеазата ослободена од клетките, а резидуалниот Тризол значително ќе го намали односот на А260/А230.
Начин на обработка: При центрифугирање, мора да се забележи дека фенолот во Тризол е лесно растворлив во водена фаза под услови на 4° и собна температура.

4. Остатоци од етанол
Етанолот се користи во последниот процес за таложење на ДНК додека се раствораат јоните на сол кои можат да се врзат за ДНК.Апсорпционата бранова должина од највисокитеврв на апсорпција наетанолот е исто така на 230-240 nm, штоќе го намали и односот на A260/A230.
Методот за избегнување на остатоци од етанол може да се повтори двапати за време на финалното елуирање, дувајќи воаспиратор за чаддве минути за да се дозволи етанолот целосно да испари пред да се додаде пуфер за елуирање.
Сепак, треба да се знае дека односот е само евалуациски индекс на квалитетот на РНК.Ако горенаведените операции се строго регулирани, отстапувањето помеѓу соодносот и стандардниот опсег нема да има големо влијание врз експериментите низводно.
Поврзани производи:
Комплет за изолација на тотална РНК на животните
Комплет за изолација на тотална РНК на растенијата
Комплет за изолација на тотална РНК на клетките
Комплет за изолација на тотална РНК на растенијата Плус