Escherichia Coli O157: Комплет за откривање на нуклеинска киселина H7 (Метод на флуоресцентна сонда PCR/лиофилизација)
Опис на комплет:
Кат.бр.FP103
Се користи за брзо откривање и скрининг на E. coli O157:H7 во примероци од храна, добиточна храна, вода и примероци од животната средина.
Описи
Се користи забрзо откривање и скрининг на E. coli O157:H7 во примероци од храна, добиточна храна, вода и примероци од животната средина.
[Принцип на тестирање]
Според принципот на флуоресцентна PCR технологија, специфичните прајмери и Taqman сонди се дизајнирани за специфичниот ген на Escherichia coli O157: H7, и детектирани со флуоресцентен PCR инструмент, за да се реализира детекција на Escherichia coli O157: H7 Квалитативна детекција на ДНК.
Содржина на комплетот
Забелешка: ROX канал сондата не е вклучена.
| Cкомпоненти | Спецификација | Qединство |
| Тампон А | Цевка | 1 |
| Тампон Б | Цевка | 1 |
| Позитивна контрола | Цевка | 1 |
| Негативна контрола | Цевка | 1 |
Очекувана употреба
Се користи за брзо откривање и скрининг на E. coli O157:H7 во примероци од храна, добиточна храна, вода и примероци од животната средина.
Услови на чување и датум на истекување
Да се чува на -20℃ на темно и да се избегнува повторено замрзнување и одмрзнување.
Рокот на важност е 12месеци, а датумот на производство е прикажан на надворешното пакување.
Инструменти и потрошен материјал
Флуоресцентен квантитативен PCR инструмент, пиштол за пипети и соодветни врвови, вител шејкер, мини центрифуга.
Употреба
1. Обработка на примероци
1.1 Тип на примерок: Овој комплет е погоден за примероци од храна, добиточна храна, вода и други примероци за кои постои сомневање дека се контаминирани со Escherichia coli O157:H7.За длабоко обработени месни производи, пијалоци и други супстанции што содржат пигменти, тие треба да се исплакнат за да се избегне влијание врз собирањето на флуоресцентните сигнали.
1.2.
- Nекстракција на уклеинска киселина
Земете 20 mL раствор за збогатување во епрувета со центрифуга од 1,5 mL, додадете 200 μL микробиолошки лизат (потребен е дополнителен комплет), вртлог 30 секунди, центрифугирајте кратко и оставете го настрана.
Забелешки: Екстракцијата на нуклеинската киселина од лизатот треба да заврши во рок од 10 минути и не може да се чува долго време.
3. Засилување на нуклеинска киселина
3.1 Вклучете го флуоресцентниот квантитативен PCR инструмент за употреба.
Пуфер А и пуфер Б од комплетот, топете ги темелно и центрифугирајте кратко.Додадете 18 μL пуфер А и 2 μL пуфер Б на секоја епрувета за реакција на PCR.Потоа додадете по 5 ml од негативната контрола, екстрахираната нуклеинска киселина и позитивната контрола во епруветите за реакција на PCR, затворете ги цевките и накратко центрифугирајте.
3.3 Префрлете ја цевката за реакција на PCR на флуоресцентна PCR машина и користете ги следните постапки за да извршите експерименти за засилување: изберете 25 mL за системот за реакција, собирајте флуоресцентни сигнали на 60°C за секој циклус и изберете FAM за каналот за откривање.
| Чекор | Програма | Број на циклуси |
| 1 | 37℃ 5 мин | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 мин | 1 |
| 3 | 95°C 15 сек | 4 0 |
| 60℃ 30s (собира флуоресценција) |
Насоки за анализа на проблеми
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Не може да се екстрахира РНК или приносот на нуклеинска киселина е низок
Обично има многу фактори кои влијаат на ефикасноста на обновувањето, како што се: содржината на РНК на примерокот, начинот на работа, волуменот на елуцијата итн.
Анализа на вообичаени причини:
1.Ледена бања или центрифугирање на ниска температура (4 °C) за време на работата.
Предлог: Работа на собна температура (15-25 ° C), никогаш ледена бања и центрифуга со ниска температура.
2. Несоодветно складирање примероци или складирање примероци предолго.
Предлог: Чувајте ги примероците на -80 ° C или замрзнувајте во течен азот и избегнувајте повеќекратна употреба за замрзнување-одмрзнување;обидете се да користите свежо собрани примероци за екстракција на РНК.
3.Недоволна лиза на примерокот
Препорака: Ве молиме проверете дали примерокот и работниот раствор (Линеарен акриламид) се темелно измешани и инкубирани 10 минути на собна температура (15-25 ° C)
4. Елуентот е погрешно додаден
Препорака: Проверете дали ddH2O без RNase е додаден во средината на мембраната на колоната за прочистување
5. Несоодветен волумен на безводен етанол во пуферот viRW2
Предлог: Ве молиме следете ги упатствата, додајте го правилниот волумен на безводен етанол во Buffer viRW2 и добро измешајте ги пред да го користите комплетот.
6.Неправилно користење на примерокот.
Предлог: 200µl примерок на 500µl од Buffer viRL.Прекумерниот волумен на примерокот ќе резултира со намалена стапка на екстракција на РНК.
7.Несоодветен волумен на елуирање или нецелосно елуирање.
Предлог: Волуменот на елуентот на колоната за прочистување е 30-50μl;ако ефектот на елуција не е задоволителен, се препорачува да се додаде претходно загреан ddH без RNase2О и продолжете го времето за ставање на собна температура, како на пример 5-10 мин
8. Колоната за прочистување има остатоци од етанол по испирање во пуфер viRW2.
Предлог: Ако етанолот сè уште останува по плакнењето во пуфер viRW2 и центрифугирањето во празна цевка 2 минути, колоната за прочистување може да се остави на собна температура 5 минути по центрифугирањето во празна цевка за целосно отстранување на преостанатиот етанол.
Разградувањето на прочистените молекули на РНК
Квалитетот на прочистената РНК е поврзан со фактори како што се складирање на примероци, контаминација со RNase и работа.
Анализа на вообичаени причини:
1. Собраните примероци не беа навреме зачувани.
Предлог: Ако примерокот не се користи навреме по собирањето, ве молиме чувајте го веднаш на -80 ℃ или течен азот.За екстракција на молекули на РНК, обидете се да користите свежо собрани примероци секогаш кога е можно.
2. Собраните примероци постојано се замрзнуваа и одмрзнуваа.
Предлог: Избегнувајте повеќекратно замрзнување и одмрзнување (не повеќе од еднаш) за време на собирањето и складирањето на примерокот, инаку приносот на нуклеинската киселина ќе се намали.
3.RNase беше внесена во операционата сала или не се носеа ракавици за еднократна употреба, маски и сл.
Предлог: Експериментот за екстракција на молекули на РНК најдобро се изведува во посебна просторија за операции на РНК, а експерименталната маса се чисти пред експериментот.Носете ракавици и маски за еднократна употреба за време на експериментот за да избегнете деградација на РНК предизвикана од воведувањето на RNase.
4. Реагенсот е контаминиран со RNase за време на употребата.
Предлог: Заменете го со нов комплет за изолација на вирусна РНК за поврзани експерименти.
5. Контаминација со RNase на цевките од центрифугата, врвовите на пипетите итн. Предлог: Проверете дали цевките за центрифуга, врвовите на пипетите и пипетите се без RNase.
Прочистените молекули на РНК влијаеле на низводните експерименти
Молекулите на РНК прочистени со колоната за прочистување ќе влијаат на низводните експерименти ако има премногу сол јони или протеини, како што се: обратна транскрипција, северна размачкана итн.
1. Во елуираните РНК молекули има преостанати јони на сол.
Препорака: Проверете дали е додаден точниот волумен на безводен етанол во Buffer viRW2 и измијте ја колоната за прочистување двапати според правилната брзина на центрифугирање на упатството за работа.Потоа извршете центрифугирање за да ја отстраните контаминацијата со јони на сол во најголема мера
2. Во елуираните РНК молекули има преостанат етанол
Предлог: откако ќе потврдите дека столбовите за прочистување се исплакнати со Buffer viRW2, извршете центрифугирање во празни цевки според центрифугалната брзина на упатството за работа.Ако сè уште има преостанат етанол, може да се остави 5 минути на собна температура по центрифугирање во празна цевка за да се отстрани преостанатиот етанол во најголема мера.
Упатства за употреба:
Упатство за употреба во комплет за изолација на вирусна РНК
