Комплет за изолација на ДНК со букален брис/FTA картичка за геномска екстракција или прочистување на ДНК од букални брисеви
Опис на комплет:
Брзо прочистете ја висококвалитетната геномска ДНК од примероците од букален брис/FTA картичка.
◮Нема контаминација со RNase:Колоната само за ДНК обезбедена од комплетот овозможува отстранување на РНК од геномната ДНК без додавање на RNase за време на експериментот, спречувајќи ја лабораторијата да биде контаминирана со егзогена RNase.
◮Брза брзина:Foregene протеазата има поголема активност од сличните протеази и брзо ги вари примероците од ткивото;операцијата е едноставна, а операцијата за екстракција на геномската ДНК може да се заврши во рок од 20-80 минути.
◮Погодно:Центрифугирањето се врши на собна температура и нема потреба од центрифугирање на ниски температури на 4°C или таложење на ДНК со етанол.
◮Безбедност:Не е потребна екстракција со органски реагенс.
◮Висок квалитет:Извлечената геномска ДНК има големи фрагменти, без РНК, без РНаза и екстремно ниска содржина на јони, што може да ги задоволи барањата на различни експерименти.
◮Систем за микроелуција:Може да ја зголеми концентрацијата на геномската ДНК, што е погодно за откривање или експеримент низводно.
Опис
Овој комплет обезбедува ефикасен и брз метод за добивање на висококонцентрирана геномска ДНК од букални брисеви и FTA картичка (крвни дамки).Користење на нашата компанија'Уникатната спин колона и формула на силика мембрана само со ДНК, во комбинација со Foregene Protease, геномската ДНК со висока концентрација и квалитет може да се екстрахира за 80 минути.Специјално дизајнираната мала колона за прочистување ја врзува геномната ДНК, а ДНК може да се елуира со мала количина (15μl) систем за елуција за зголемување на концентрацијата на добиената геномска ДНК, што е погодно за откривање или експеримент низводно.Комплетот може да обработи еден или повеќе примероци одеднаш, а процесот на прочистување не бара екстракција на органски супстанции како што се фенол, хлороформ и таложење на изопропанол или етанол што одзема многу време, а операцијата е едноставна и заштедува време.
Спецификации
50 Подготовки
Компоненти на комплетот
| Тампон ST1 |
| Тампон ST2 |
| Линеарен акриламид |
| Бафер PW |
| Тампон WB |
| Бафер EB |
| Foregene протеаза |
| Колона само за ДНК |
| Инструкции |
Карактеристики и предности
-Без контаминација со RNase: Колоната само со ДНК обезбедена од комплетот овозможува отстранување на РНК од геномната ДНК без додавање на RNase за време на експериментот, избегнувајќи ја лабораторијата да биде контаминирана со егзогена RNase.
-Брза брзина: Foregene Protease има поголема активност од сличните протеази, брзо ги вари примероците;едноставна операција.
-Погодно: Центрифугирањето се врши на собна температура и нема потреба од центрифугирање на ниски температури на 4°C или таложење на ДНК со етанол.
-Безбедност: Не е потребна екстракција со органски реагенс.
-Висок квалитет: Извлечената геномска ДНК има големи фрагменти, без РНК, без РНаза и екстремно ниска содржина на јони, што може да ги задоволи барањата на различни експерименти.
-Систем за микро-елуција: Може да ја зголеми концентрацијата на геномната ДНК, што е погодно за откривање или експеримент низводно.
Апликација за комплет
Погоден е за прочистување на геномната ДНК од следниве примероци: букални брисеви, FTA картичка (крвни дамки).
Складирање и рок на траење
-Овој комплет може да се чува 12 месеци под суви услови на собна температура (15-25°C);ако треба да се чува подолго време, може да се чува на 2-8°C.
Забелешка: Ако се чува на ниска температура, растворот е подложен на врнежи.Пред употреба, задолжително ставете го растворот во комплетот на собна температура одреден временски период.Доколку е потребно, загрејте го во водена бања на 37°C 10 минути за да се раствори талогот и измешајте го пред употреба.
-Растворот Foregene Protease има единствена формула, која е активна кога се чува на собна температура подолго време (3 месеци);неговата активност и стабилност ќе бидат подобри кога се чува на 4°C, затоа се препорачува да се чува на 4°C, не заборавајте да не го чувате на -20°C.
Колоната за прочистување е затнат
Во овој комплет, во операцијата за екстракција на геномската ДНК, колоната за прочистување директно се адсорбира на смесата за ензимска лиза на примерокот без чекор на центрифугирање, а колоната за прочистување може да биде блокирана поради нецелосна ензимизација и висока вискозност на примерокот.
Следниве можни причини се како што следува:
1. Нецелосно ензимско варење на примероци од ткиво.
Препорака: Времето на обработка на примерокот на Foregene Protease може соодветно да се продолжи или супернатантот може да се земе по центрифугирање на 12.000 вртежи во минута (~ 13.400 × g) за 5 мин.
2. Прекумерна употреба на примероци од ткиво или големи ткива.
Препорака: Најдобро е да не надминувате 1 букален брис во примерокот;ако примерокот е премногу голем, соодветно зголемете ја дозата на пуфер ST1, Foregene протеаза, пуфер ST2.
3. Вискозноста на примерокот е превисок.
Препорака: Мострите може соодветно да се разредат со 10 mM Tris-HCl пред екстракција на геномската ДНК.
4. Исцицани се фрагменти од крвната карта.
Препорака: Времето на минлива центрифугација на чекор 6 на геномската екстракција на крвна дамка (FTA Card) може соодветно да се продолжи.
Низок принос или без ДНК
Често има различни фактори кои влијаат на приносот на геномската ДНК, вклучувајќи го потеклото на примерокот, условите за складирање на примерокот, подготовката на примерокот, манипулацијата итн.
Геномската ДНК не може да се добие при екстракција
Можните причини се како што следува:
1. Неправилното зачувување на примероците или предолго складирање доведува до деградација на геномската ДНК.
Препорака: Оралните брисеви по можност треба да бидат свежо земени, и не е препорачливо да се користат зачувани брисеви за операции за екстракција на геномска ДНК;примероците од крвна дамка треба да гарантираат дека квалитетот е квалификуван и времето на складирање не треба да биде премногу долго.
2. Премалата употреба на ткиво може да резултира со невадење на соодветната геномска ДНК.
Препорака: Следете ги упатствата за земање примероци од букалното брисче во упатството за операција и избришете го колку што е можно повеќе за да може да се прикачат доволно клетки на оралниот брис за екстракција на геномска ДНК;за екстракција на примерок од крвна дамка, површината за сечење крвна точка може соодветно да се зголеми.
3. Foregene Protease е неправилно сочувана, што резултира со намалување на нејзината активност или инактивација.
Препорака: Потврдете ги условите за складирање на Foregene протеазата или заменете ја со нова Foregene протеаза за ензимска реакција.
4. Неправилното зачувување на комплетот или времето на складирање е предолго, што резултира со откажување на некои компоненти во комплетот.
Препорака: Купете нов комплет за изолација на ДНК од букален брис за сродни процедури.
5. Пуфер WB не додава апсолутен етанол.
Препорака: Потврдете дека пуферот WB го додава точниот волумен на апсолутен етанол.
6. Елуентот не е правилно додаден во силиконскиот филм.
Препорака: Додадете 65 °C претходно загреани капки елуент до средината на силиконската мембрана и оставете на собна температура 5 минути за да ја зголемите ефикасноста на елуцијата.
Изолирана геномска ДНК со низок принос
Следниве можни причини се како што следува:
1. Неправилното зачувување на примероците или предолго складирање доведува до деградација на геномската ДНК.
Препорака: Оралните брисеви се претпочитаат да се земаат свеж примерок, а зачуваните брисеви не треба да се користат за екстракција на геномска ДНК.
2. Ако количината на примерок од ткиво е премала, содржината на извлечената геномска ДНК ќе биде помала.
Препорака: Следете ги упатствата за земање мостри од орален брис во упатството за работа, бришејќи што е можно повеќе пати за да може да се прикачат доволно клетки на оралниот брис за екстракција на геномска ДНК.
3. Foregene Protease е неправилно сочувана, што резултира со намалување на нејзината активност или инактивација.
Препорака: Потврдете ги условите за складирање на Foregene протеазата или заменете ја со нова Foregene протеаза за ензимска реакција.
4. Проблеми со елуентот.
Препорака: Користете пуфер EB за елуција;ако се користи ddH2O или други елуенти, потврдете дека pH на елуатот е помеѓу 7,0-8,5.
5. Елуатот не е правилно додаден по капка.
Препорака: Додадете капки елуент на средината на силиконската мембрана и оставете на собна температура 5 минути за да ја зголемите ефикасноста на елуцијата.
6. Течноста за елуирање се акумулира премалку.
Препорака: Користете елуент за елуирање на геномската ДНК како што се бара во упатствата, најмалку не помалку од 15 μl.
Ниска чистота на геномската ДНК изолирана
Ниската чистота на геномската ДНК може да доведе до неуспех или незадоволителни резултати од низводните експерименти, како што се: ензимите не можат да се отворат, PCR не може да го добие генскиот фрагмент од интерес итн.
Можните причини се како што следува:
1. Загадување со хетеропротеини, загадување со РНК.
Анализа: Колоната за прочистување не беше измиена со користење на Buffer PW;колоната за прочистување на миење Buffer PW не беше измиена со точната центрифугална брзина.
Препорака: Уверете се дека нема таложење во супернатантот пред да додадете етанол;не заборавајте да ја измиете колоната за прочистување според упатствата и овој чекор не може да се испушти.
2. Загадување со нечистотии со јони.
Анализа: Колоната за прочистување со миење пуфер WB беше испуштена или измиена само еднаш, што резултираше со преостаната јонска контаминација.
Препорака: Погрижете се да го измиете Buffer WB 2 пати како што е наведено за да ги отстраните преостанатите јони колку што е можно повеќе.
3. Контаминација со РНК ензими.
Анализа: Странските RN-ази беа додадени во баферот;Операцијата за миење на тампон PW беше неточна, што резултираше со остатоци од RNase, што влијаеше на низводните експериментални операции на РНК, како што е ин витро транскрипцијата.
Препорака: Комплетот за изолација на нуклеинска киселина од серијата Foregene може да ја отстрани РНК без дополнително додавање на RNase, така што комплетот за изолација на ДНК со букален брис/FTA картичка не треба да додава RNase;не заборавајте да ги следите упатствата за колоната за прочистување на миењето Buffer PW и овој чекор не може да се испушти.
4. Остатоци од етанол.
Анализа: Пуфер WB не изврши центрифугирање со празна цевка по миењето на колоната за прочистување.
Препорака: Изведете ја правилната операција на центрифугирање на празна цевка според упатствата.
5. Друго загадување со нечистотија.
Анализа: Зачуваните примероци или специјалните примероци не се претходно третирани.
Препорака: Темелно претходно обработете го примерокот како што е наведено.
