Најчесто поставувани прашања заКомплет за изолација на тотална РНК на животните

Следнава анализа на проблемите со кои може да се сретнетеекстракција на животинско ткиво/клеточна РНК will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНК не се екстрахира или приносите на РНК се ниски

Често има различни фактори кои влијаат на ефикасноста на обновувањето, како што се: содржината на RNA примерок од ткиво, начинот на работа, волуменот на елуцијата итн.

1. Ледена бања или криогена (4 °C) центрифугирање беше извршена за време на работата.

Препорака: Работете на собна температура (15-25 ° C) во текот на целиот процес, не правете ледена бања и центрифугирајте на ниски температури.

2. Неправилно зачувување на примерокот или прекумерно време на складирање на примерокот.

Препорака: Чувајте ги примероците на -80 °C или замрзнете ги во течен азот и избегнувајте повеќекратна употреба за замрзнување-одмрзнување;обидете се да користите свежо ткиво или култивирани клетки за екстракција на РНК.

3. Недоволна лиза на примерокот.

Препорака: При хомогенизирање на ткивото, проверете дали ткивото е доволно хомогенизирано и дека ткивните клетки се доволно поделени за да се објасни ослободувањето на РНК.

4. Елуентот не е правилно додаден.

Препорака: Потврдете дека ddH без RNase₂O се додава по капка во средината на мембраната на колоната за прочистување.

5. Точниот волумен на апсолутен етанол не беше додаден во пуфер RL2 или пуфер RW2.

Препорака: Следете ги упатствата, додајте го точниот волумен на апсолутен етанол во Buffer RL2 и Buffer RW2 и добро измешајте пред да го користите комплетот.

6. Дозата на примерок од ткиво не е соодветна.

Препорака: Користете 10-20 mg ткиво или (1-5) × 10⁶клетки на 500 μl пуфер RL1, бидејќи прекумерната употреба на ткиво може да резултира со намалена екстракција на РНК.

7. Несоодветен волумен на елуирање или нецелосно елуирање.

Препорака: Волуменот на елуција на колоната за прочистување е 50-200 μl;ако ефектот на елуција не е задоволителен, се препорачува да се продолжи времето на поставување на собна температура по додавање на претходно загреан ddH без RNase₂О, на пр. 5-10 мин.

8. Колоната за прочистување има остатоци од етанол по миењето со пуфер RW2.

Препорака: Ако има остатоци од етанол по миењето со пуфер RW2, центрифугирање на празна цевка за 1 мин, времето за операција на центрифугирање на празна цевка може да се зголеми на 2 минути или колоната за прочистување може да се стави на собна температура 5 минути за соодветно да се отстрани преостанатиот етанол.

Прочистената РНК се разградува

Квалитетот на прочистената РНК е поврзан со фактори како што се зачувување на примерокот, контаминација со RNase и манипулација итн.

1. Примероците од ткивото не се чуваат навреме.

Препорака: Ако примероците од ткиво или клетките не се користат навремено по собирањето, веднаш да се криопрезервира на -80 °C или течен азот.За екстракција на РНК, користете ново земено ткиво или клеточен примерок секогаш кога е можно.

2. Повторено замрзнување-одмрзнување на примероци од ткиво.

Препорака: Кога складирате примероци од ткиво, најдобро е да ги исечете на мали парчиња за зачувување и да отстраните едно од парчињата кога ги користите за да избегнете повторено замрзнување-одмрзнување на примерокот и разградување на РНК.

3. За време на операцијата се внесува RNase или не се носат ракавици за еднократна употреба, маски итн.

Препорака: Експериментите за екстракција на РНК најдобро се изведуваат во посебни простории за манипулација со РНК и табелата се брише пред експериментот.

Носете ракавици и маски за еднократна употреба за време на експериментот за да ја минимизирате деградацијата на РНК предизвикана од воведувањето на RNase.

4. Реагенсите се контаминирани со RNase за време на употребата.

Препорака: Заменете го со нов комплет за изолација на тотална РНК на животните за поврзани експерименти.

5. Цевките за центрифугирање, врвовите итн. што се користат при манипулација со РНК се контаминирани со RNase.

Препорака: Потврдете дека цевките за центрифуга, врвовите, пипетите итн. што се користат при екстракција на РНК се без RNase.

Прочистената добиена РНК влијае на низводните експерименти

РНК прочистена од колоната за прочистување, ако сол јони, содржината на протеини е премногу голема ќе влијае на низводно експеримент, како што се: обратна транскрипција, Северен Блот et al.

1. Елуираната РНК има остатоци од сол јони.

Препорака: Потврдете дека точниот волумен на етанол е додаден во баферот RW2 и изведете 2 миење на колоната за прочистување со центрифугалната брзина назначена за работа;ако има остатоци од јонски сол, оставете ја колоната за прочистување во пуфер RW2 5 минути на собна температура и направете центрифугирање за да се максимизира отстранувањето на контаминацијата со сол.

2. Остаток од етанол во елуирана РНК.

Препорака: Потврдете дека по миењето со тампон RW2, извршете ја операцијата на центрифугирање на празната цевка со брзината на центрифугирање наведена за работа, зголемете го времето на операцијата на центрифугирање на празната цевка на 2 минути ако сè уште има остатоци од етанол или оставете го на собна температура 5 минути по центрифугирањето на празната цевка за да се максимизира отстранувањето на туетанолот.

Изолација на типови примероци на нулцеинска киселина

Комплетите за изолација на РНК на Foregene може да добијат целосна изолација/екстракција на РНК од следниве извори на примероци: Животинско ткиво, растение, клетки, вирусни, крви итн.

Како да го чувам комплетот

Складирање на собна температура 24 месеци.