Што е mRNA вакцина
Вакцината mRNA ја пренесува РНК до клетките на телото за да се изразат и да се произведат протеински антигени по релевантни модификации in vitro, со што телото ќе произведе имунолошки одговор против антигенот, со што се проширува имунолошкиот капацитет на телото[1,3].
Слика 1: Шематски дијаграм на ефектот на директно вбризгување на mRNA вакцина [2]
Класификација на mRNA вакцини
mRNA вакцините се поделени на два вида:нереплицирачкиmRNA исамозасилувачкиmRNA: самозасилувачката mRNA не само што го кодира целниот антиген, туку ја кодира и репликацијата што овозможува интрацелуларна РНК засилување и механизам за изразување на протеини.МРНК вакцините што не се реплицираат само ги кодираат целните антигени и содржат 5'и 3'непреведени региони (UTR).Тие обезбедуваат сеопфатна стимулација на приспособливоста и вродениот имунитет, имено in situ антигенска експресија и пренос на сигнал за опасност, и ги имаат следните апликации Карактеристики[2,3]
lМоже да обезбеди сеопфатна стимулација на приспособливоста и вродениот имунитет, имено на самото изразување на антиген и пренос на опасен сигнал
lМоже да предизвика „урамнотежен“ имунолошки одговор, вклучувајќи хуморални и клеточни ефектори и имунолошка меморија
lМоже да комбинира различни антигени без да ја зголеми сложеноста на формулацијата на вакцината
lКонтинуирано подобрување на имунолошкиот потенцијал може да се постигне преку повторена вакцинација и нема или има мал имунолошки одговор на носителот
lТоплински стабилните mRNA вакцини може да го поедностават транспортот и складирањето на вакцините
Слика 2: Шематски дијаграм на mRNA вакцината и нејзиниот механизам за изразување на антиген [4]
Карактеристики на mRNA вакцините
Во споредба со традиционалните вакцини, mRNA вакцините имаат едноставни процеси на производство, брзи брзини на развој, немаат потреба од клеточна култура и ниска цена.Во споредба со ДНК вакцините, mRNA вакцините не треба да навлезат во јадрото и не постои ризик од интеграција во геномот на домаќинот.Полуживотот може да се прилагоди со модификација.
Табела 1: Предности и недостатоци на mRNA вакцините
|
| Предност | Недостаток |
| mRNA вакцина | Брзо истражување и развој, производството на вакцини трае само 40 дена | Активирајте непотребен имунолошки одговор
|
| mRNA нестабилност под физиолошки услови, лесно се разградува | Нема да се интегрира во геномот за да се избегнат можните терапевтски мутации
| |
| Нема потреба од сигнал за нуклеарна локализација, транскрипција | Ефективноста на безбедносното нуклеарно оружје останува да се потврди
|
Слика 3: Дијаграм на тек на производство и подготовка на mRNA вакцина [4]
Комплет за изолација на вирусна РНК Foregene
RT-qPCR Лесно (еден чекор)
Подобрени стратегии за подготовка на mRNA вакцини
Поради лошата стабилност на самата mRNA, лесното разградување од нуклеазите во ткивата, ниската ефикасност на влез во клетките и ниската ефикасност на транслација, овие дефекти ја ограничуваат примената на вакцините со mRNA.Ефикасноста на преводот исто така игра многу клучна улога.Возилата за испорака може да се поделат на вирусни вектори и невирусни вектори (вклучувајќи липозоми, нелипозоми, вируси, наночестички итн.).Затоа, потребни се соодветни мерки за подобрување.Следното е стратегија за фармаколошко подобрување за подготовка на mRNA[2]
1 Синтетизирајте аналози на капа или користете ензими за покривање за да ја стабилизирате mRNA и да го зголемите транслацијата на протеини со врзување за факторот за иницирање на еукариотски превод 4E (EIF4E)
2 Прилагодете ги елементите во 5'-непреведениот регион (UTR) и 3'-UTR за да се стабилизира mRNA и да се зголеми транслацијата на протеини
3 Додавањето Poly(A) опашка може да ја стабилизира mRNA и да го зголеми транслацијата на протеините
4 Модифицирани нуклеозиди за намалување на вродената имунолошка активација и зголемување на транслацијата
5 Третманот со RNase III и брзо прочистување на протеинска течна хроматографија (FPLC) може да ја намали имунолошката активација и да го зголеми транслацијата
6 Оптимизирајте секвенци или кодони за да го зголемите преводот
7 Заеднички доставување на фактори за иницијација на превод и други методи за промена на транслацијата и имуногеноста
Слика 4: Ин витро транскрипција (IVT) mRNA производство и процес на склопување [5]
Подготовка на плазмидна ДНК во големи размери
Прочистувањето на плазмидната ДНК главно ги отстранува загадувачите како што се РНК, ДНК ендотоксинот со отворен круг, протеинот на домаќинот и нуклеинската киселина на домаќинот и обично го трансформира рекомбинантниот плазмид во E. coli.E. coli се подложува на ферментација со висока густина, потоа сепарација на цврста течност и собирање на E. coli.E. coli потоа е подложен на алкална лиза, центрифугално одвојување на цврсто-течно и микрофилтрациско разјаснување по лиза, ултрафилтрација и концентрација по разјаснување, а потоа и хроматографско прочистување.
Прочистување на плазмидната ДНК:
Foregene генерален плазмид мини комплет
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[Ј].免疫学杂志, 2016 (05): 446-449.
【2】Парди Н, Хоган МЈ, Портер ФВ и др.mRNA вакцини - нова ера во вакцинологијата[J].Nature Reviews Drug Discovery, 2018 година.
【3】Крампс Т., Елберс К. (2017) Вовед во РНК вакцини.Во: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Методи во молекуларна биологија, том 1499. Хумана Прес, Њујорк, Њујорк.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, и сор.mRNA како трансформативна технологија за развој на вакцини за контрола на заразни болести[J].Молекуларна терапија, 2019 година.
【5】Серхио Линарес-Фернандез, Селин Лакроа, Приспособување на mRNA вакцина за балансирање на вродениот/адаптивен имунолошки одговор, Трендови во молекуларната медицина, том 26, број 3,2020, страници 311-323.
Време на објавување: 05.08.2021
