Совети за подобрување на обновувањето на лепилото

1. Зголемете го оптоварувањето на примерокот за време на електрофореза.

2. Користете свежо подготвен пуфер за електрофореза.

3. Кога сечете лепило, обидете се да го исечете само лепилото со ленти за да го намалите обемот на сечење на лепилото: не ви треба лепак со неколку наменски фрагменти, во спротивно тоа ќе влијае на стапката на обновување.

4. Откако ќе стопите две или повеќе парчиња лепак, употребете цевка без разлика колку е голем волуменот и префрлете ја во истата колона.

5. Растворот додаден во сол може да биде малку повеќе, што е попогодно за врзување на ДНК за мембраната, но генерално не надминува 750 ul.

6. Клучот за обновување на гелот е врзувањето на ДНК за колоната преку концентрацијата на сол, киселоста (полнење) и хидрофобноста на растворот во колоната.Затоа, ако pH на пуферот за електрофореза е превисока, 10 ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) може да се додадат во растворот;со цел подобро да се пресретнат молекулите на ДНК на мембраната, може да се додаде 30% изопропанол за да се загрее во течноста по растворање на лепилото.

7. Пред да го додадете елуентот, оставете ја колоната на собна температура неколку минути (околу 10 минути) за целосно да испари етанолот.

8. Конечно, додадете помалку елуент за да го минимизирате обемот на обновување.Општо земено, 30-50μl елуент се користи за елуирање (не е премногу малку, во спротивно нема да може да ја намокри мембраната, што не е погодно за елуција);капките на елуцијата се во центарот на мембраната, за целосно елуирање на ДНК врзана за мембраната.

9. По додавањето на елуентот, може да се елуира во водена бања од 55 степени 5 минути или да се стави во водена бања од 50 степени повеќе од 10 минути, или да се затвори со парафилм на 4 степени преку ноќ, а потоа да се центрифугира за обновување следниот ден, ефектот е добар.

10. Додадете го центрифугираниот елуат назад во колоната за адсорпција и повторно центрифугирајте.

Детални методи и процедури за обновување на PCR производ

1. Обична рециклирање на гума

Ако сакате да го вратите лепилото, најдобро е да користите комплет, кој е удобен и има малку поголема стапка на обновување.Ако навистина треба да го вратите рачно, можете да додадете 3 пати поголем волумен на TE по сечењето на лепилото.По топењето во водена бања, фенолот, фенолот/хлороформот се екстрахираат чисто, а етанолот се таложи.Тоа е тоа.

2. Обновување на ДНК од гелови со ниска точка на топење

Прочистување на фрагменти на ДНК Додадете TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) еднаков на волуменот на гелот и ставете го во водена бања на 65°C 5 минути за целосно да се раствори гелот.

Откако беше доведена на собна температура, беше додадена еднаква количина фенол (заситен со ТЕ, ТЕ беше затворен во горниот слој, а долниот слој на фенол беше отстранет) и мешавината беше нежно измешана (не е потребно мешање) и се центрифугира на 12.000 вртежи во минута за 3 минути.Повторете 1-2 пати.

Земете го супернатантот, додадете 0,1 волумен од 3 mol/L натриум ацетат (pH 5,2) и 2,5 пати поголем волумен од апсолутен етанол за да се изврши таложење со етанол.Растворете ја прочистената ДНК со соодветно количество ТЕ, измерете ја содржината и подгответе се за употреба (може да се користи за анализа на структурата на целниот ген, подготовка на сонда итн.).

3. Обновување на PCR со добра специфичност за засилување

Ако специфичноста на PCR засилувањето е добра, тоа е само едноставно прочистување и обновување на PCR производот.Можете да додадете 50 ug/ml протеиназа К на производот PCR, 37 степени за 1 час, да се екстрахира еднаш со фенол/хлороформ, да се екстрахира еднаш со хлороформ и да се додаде 0,1 волумен од супернатантот.Натриум ацетатот беше обновен со таложење со 2,5 волумени апсолутен етанол.

Поврзани производи:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/