Колку знаеш

За Некстракција на уклеинска киселина

Почетокот и крајот на прочистената нуклеинска киселина

Се е тешко на почеток, прочистена нуклеинска киселина е најмногу

Иницирање на молекуларни експерименти, за последователни експерименти

Успехот или неуспехот имаат клучно влијание.

УВ спектрофотометарот за трага/ултра трага е фаворизиран од многу научни истражувачи бидејќи може едноставно, брзо и економично да открие концентрација на нуклеинска киселина и остатоци од јони на протеини и сол.

Како што сите знаеме, A260 значи OD вредност на апсорпција на нуклеинска киселина, A280 значи апсорпција на концентрација на протеини OD вредност, A230 значи апсорпција на јонска концентрација на сол, така што A260 може да ја конвертира концентрацијата на нуклеинска киселина, A260/280 значи протеински остаток, A260/230 значи остаток на јони на сол е само правило засновано на голем број.конвенционален“ да се верува дека може да ја објасни чистотата на ДНК и РНК наодреден степен.Тоа не е единствениот стандард за идентификација на приносот и чистотата на нуклеинската киселина, тој се користи само како референца и не е „златен стандард“.

Прирачникот Thermo Fisher ND-2000 ја нагласува веродостојноста на резултатите од тестот

Причината е што резултатите добиени со користење на микро/ултрамикро УВ спектрофотометар само го рефлектираат приносот и чистотата на нуклеинската киселина од страна, а има многу фактори кои влијаат (оптичка патека, волумен на примерокот, концентрација на примерокот, pH вредност, други јони кои влијаат на мерењето на апсорпцијата итн.), измерената вредност на OD не мора да биде точна.Во исто време, поради недостаток на специфичност на материјалот за определување на вредноста на апсорпција, едноверижна ДНК, двоверижна ДНК, РНК, dNTP и некои протеини, сите имаат врвови на апсорпција на бранова должина од 260 nm, а концентрацијата одредена само од А260 не е нужно вистинската ДНК или РНК.Концентрацијата, и нејзиниот интегритет и деградација не може да се суди.

Па, како да се суди за квалитетот на нашата прочистена нуклеинска киселина?Покрај користењето на микро/ултрамикро УВ спектрофотометар за детекција, потребни се и методи како што е електрофореза со гел агароза за визуелно прикажување на чистотата и интегритетот на нуклеинската киселина и до одреден степен да се покаже концентрацијата.На овој начин, приносот на нуклеинската киселина и чистотата добиени од резултатите од откривањето на различни методи се веродостојни.

Споредба на експериментален графикон

Геномската ДНК на клетките H1299 беше извлечена со помош на комплетите за екстракција на ДНК на компанијата А и беше забележана значителна контаминација со нечистотија, што резултираше со високи вредности на ОД

(Вредност на мерење на OD и соодветниот електроферограм)

Индекс на евалуација

Дали постои „златен стандард“ за принос на нуклеинска киселина и тестирање на квалитетот?

Колку што знаеме, не постои едноставен, брз и евтин метод.Без разлика дали се работи за спектрофотометар, гел електрофореза или масена спектрометрија, сите тие ја рефлектираат концентрацијата и чистотата на нуклеинската киселина во растворот од различни аспекти, и тие треба да се проценат со повикување еден на друг.

Најдобар индекс за евалуација е секогашпоследователна експериментална апликација.Тоа не влијае на ефикасноста на обратна транскрипција и PCR засилување.Добивањето сигурни производи за засилување и вредности на Ct и добивање на целосна низа со секвенционирање е успешна екстракција на нуклеинска киселина.

Сумирајќи, гледиштето на теоријата само за сооднос треба да биде оспорено од гледиштето за „користење на добри надолни експериментални резултати како добри параметри за екстракција“!

Препорачани комплети за екстракција на ДНК РНК на Foregene за да се добие висока чистота на ДНК/РНК:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/