Олово

Долга некодирачка РНК, lncRNA е некодирачка РНК со должина поголема од 200 нуклеотиди, генерално помеѓу 200-100000 nt.lncRNA ја регулира генската експресија на епигенетско, транскрипциско и пост-транскрипциско ниво и учествува во замолчувањето на Х-хромозомот, втиснувањето на геномот и модификацијата на хроматинот, активирањето на транскрипцијата, интерференцијата во транскрипцијата, нуклеарниот транспорт, регулацијата на клеточниот циклус, клеточната диференцијација и регулацијата на дозите се поврзани со регулација и други ефекти на компензација на дозата. и превенција од болести кај луѓето, а во моментов се една од жешките точки во областа на биомедицината.

01  Видови и карактеристики на LncRNA

lncRNA е поделена на многу видови според различните извори на нејзиното формирање, како што е прикажано на сликата погоре.Ги има следните карактеристики:

1. lncRNA обично се подолги, со динамична експресија и различни методи на спојување за време на диференцијацијата
2. Во споредба со гените за кодирање, lncRNA обично има пониско ниво на изразување
3. Повеќето lncRNA имаат очигледна временска и просторна експресивна специфичност во процесот на диференцијација и развој на ткивото
4. Постојат карактеристични изрази кај туморите и другите болести
5. Субклеточните локации на lncRNA се разновидни
6. Низата е ниска во конзервација, но функцијата има одреден степен на конзервација итн.

02 Често поставувани прашања за обратна транскрипција на LncRNA

Поради ниската содржина на lncRNA во клетките, долгата должина и структурата на високо ниво, таквата РНК често има сложени структури како што се матични јамки или шноли, а RT-qPCR е склон кон проблеми со неуспешна обратна транскрипција или ниска ефикасност.

03 Решение за обратна транскрипција на LncRNA

Во централното правило, процесот на РНК вируси кои користат сопствена реверзна транскриптаза за синтетизирање на ДНК користејќи РНК како шаблон се нарекува обратна транскрипција.Процесот на користење на РНК вирусна реверзна транскриптаза за синтеза на шаблон cDNA ин витро се нарекува обратна транскрипција.Главните елементи вклучени во системот за обратна транскрипција: шаблон РНК, обратна транскриптаза, прајмери ​​и други компоненти.

1.РНК шаблон

Влијанието на шаблонот РНК врз обратната транскрипција се рефлектира во неговата структура, чистота и интегритет.Колку е поголема чистотата и интегритетот на извлечената РНК, толку е поголема ефикасноста на обратната транскрипција и поточни се последователните квантитативни резултати.РНК прочистена со вообичаено користени реагенси за екстракција на РНК често содржи остатоци од алкохол и соли на гванидин, кои имаат силен инхибиторен ефект врз повеќето реверзна транскриптаза.

2.Обратна транскриптаза

Реверзната транскриптаза има клучно влијание во целиот систем на обратна транскрипција.Соодветната температура за реверзната транскриптаза што се користи во повеќето лаборатории е генерално 42°C.Всушност, отворањето на структурата на РНК на високо ниво бара повисока температура, а барањата за реверзна транскриптаза се повисоки.

3.Прајмер

Прајмерите за обратна транскрипција вклучуваат ген-специфични прајмери, случајни прајмери ​​и Oligo dT прајмери.Повеќето lncRNA не содржат полиА опашки и важно е правилно да се поклопат случајните прајмери ​​со Oligo dT.

4.Други компоненти

Со оглед на фактот дека РНК е особено лесно да се разградува, воведувањето на компоненти во системот за обратна транскрипција може да се минимизира, што може ефективно да го спречи влегувањето на RNase и да обезбеди непречен напредок на обратната транскрипција.

Fорегендобива од шаблон РНК, обратна транскрипција во qPCR

Сеопфатно придружувајте го вашето откривање lncRNA

Вкупна РНК на животните IутехаКомплет (со колона за отстранување gDNA)

Вкупна клеточна РНК IутехаКомплет (со колона за отстранување gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (со gDNase) (Супер премикс за синтеза на cDNA на првата нишка од lncRNA)

Во реално време PCR EasyTM-SYBR Green I

Aпредности ofЕкстракција на РНК:

Комплетот користи технологија за екстракција на РНК од третата генерација, нема потреба да се користи DNase.

11 минути од култивирани клетки со плоча со 96, 24, 12 и 6 бунари, екстракција со висока ефикасност на вкупна клеточна РНК без gDNA, со висока чистота и со висок квалитет.

Предности на lncRNA обратна транскрипција:

Систем за обратна транскрипција специјално развиен за LncRNA за брзо отстранување на контаминацијата на геномската ДНК.

Системот за обратна транскрипција има висока термичка стабилност и сепак има добри перформанси на обратна транскрипција на 50°C.

Шаблони со висока содржина на GC и сложена секундарна структура може да се менуваат со висока ефикасност.

Предностиof qPCR:

Топол старт Foregene Taq Polymerase има поголема ефикасност на засилување, поголема чувствителност на засилување и поголема специфичност на засилување

Оптимизираниот Real PCR Easy Mix прави SYBR Green I да има поголема чувствителност за откривање, а неговиот интензитет на флуоресценција е 3-5 пати поголем од оној на слични производи, што може да ги задоволи потребите на различните видови квантитативни експерименти со флуоресценција.