Воспоставете ПЦР експеримент SOP за стандардизирање на однесувањето на персоналот во експериментот.
Експериментаторот строго се придржува до оперативните процедури и го минимизира PCR загадувањето што може да биде предизвикано од човечки фактори или спречува појава на загадување.Дополнително, експериментаторот треба да има соодветно професионално знаење и вештини, вклучително и познавање на ракување со поврзаната опрема, разјаснување на целиот работен процес, совладување на методите за третман на контаминација и методи за контрола на квалитетот во лабораторија и да може правилно да ги толкува резултатите од тестот.
Воспоставете стандардна PCR лабораторија.
ПЦР лабораторијата е поделена на четири области во принцип, имено област за подготовка на реагенс, област за обработка на примероци, област за засилување и област за анализа на производот за засилување.Првите две области се области пред засилување, а последните две области се пост-засилувачки области.Зоната пред засилување и зоната по засилување треба да бидат строго одделени.Експерименталните материјали, реагенсите, хартијата за снимање, пенкалата, материјалите за чистење итн., можат да течат само од областа пред засилување во областа по засилување, односно од областа за подготовка на реагенсот → област за обработка на примерокот → област за засилување → област за анализа на производот за засилување и не смеат да течат наназад.Протокот на воздух во лабораторијата, исто така, треба да тече од областа пред засилување во областа по засилување, а не да тече наназад.Идеалниот лабораториски дизајн на PCR е прикажан подолу:
Слика А: Идеален режим на поставување на PCR лабораторија со негативен притисок во тампон-собата
Слика Б: Идеален режим на поставување на PCR лабораторија со позитивен притисок во тампон-собата
Дијаграмите за поставување на PCR лабораторија дадени на Слика А и Слика Б треба да бидат поидеален режим на поставување, а лабораторијата со услови може да се однесува на овој режим за дизајнирање.За обичните лаборатории, се препорачува областа за засилување на PCR и областа за анализа на производот да може да се одделат, а отворот на капакот треба да се намали колку што е можно повеќе во областа за подготовка на примерокот и во областа за засилување на PCR.Запомнете: Производите и експерименталните материјали во областа за анализа на производот се строго забранети да се носат во областа за подготовка на примерокот и во областа за засилување на PCR.
Ако лабораторијата врши само PCR детекција и идентификација, се препорачува да се користи флуоресцентна квантитативна PCR наместо конвенционална PCR.
Резултатите од квантитативната PCR детекција на флуоресценција може да се соберат и анализираат со флуоресцентни сигнали, така што нема потреба да се отвора капакот за електрофореза по реакцијата, со што се избегнува контаминација на производот PCR предизвикана од истекување на реакционите производи за да се формираат аеросоли.Ако го зголемите бројот на отвори на капачињата за време на чекорот на вчитување на електрофорезата на гел, веројатно ќе дојде до контаминација на аеросол.Се препорачува да се промовира примената на квантитативна PCR и постепено да се замени квалитативната PCR.
За реакцијата на PCR се користи UNG системот за контаминација на производи против PCR.
Системот користи dUTP наместо dTTP.По реакцијата на PCR, сите PCR производи (фрагменти од ДНК) се инкорпорирани со dUTP;во следниот круг на PCR реакција, UNG ензимот додаден во системот се инкубира на 37°C 5 минути пред PCR, што може конкретно да ги деградира сите фрагменти на ДНК што содржат dUTP, а потоа да изврши PCR реакција.Ова може целосно да ја отстрани аеросолната контаминација предизвикана од производите на PCR.Ефектот е прикажан на сликата подолу:
Забелешка: за директната серија PCR, можете да ги изберете сериските производи од системот за контаминација на производи против PCR на ForegeneПредложете
За лаборатории кои спроведуваат големи тестови за генотипизација, силно се препорачува да се користи UNG системот за контаминација на производите против PCR за тестирање на реагенси, покрај изградбата на разумни лаборатории.
Потсетник: Употребата на овој систем не може да ја отстрани контаминацијата на производот со PCR што е веќе предизвикана.Затоа, UNG системот треба да се користи на почетокот на релевантниот тест, а системот UNG треба да се користи за PCR засилување, за да се спречи контаминација на PCR производи Лажно позитивни.
Се препорачува да се користи системот Direct PCR-UNG на Foregene при спроведување на големи тестови, како што се:
Комплет за директно PCR на растенијата-УНГ;
Комплет за директно PCR за семе од растенија-UNG;
Комплет за директно PCR за животинско ткиво-UNG;
Комплет за директна PCR опашка на глувчето-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Оваа серија на комплети од Foregeneне само што може да изврши откривање на PCR брзо и во голем обем, туку и ефикасно да ја спречи и контролира контаминацијата на производите со PCR.
Време на објавување: Мар-19-2021 година
