Следнава анализа на можни проблеми воБукалбрис/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Колоната за прочистување е затнат

Во овој комплет, во операцијата за екстракција на геномската ДНК, колоната за прочистување директно се адсорбира на смесата за ензимска лиза на примерокот без чекор на центрифугирање, а колоната за прочистување може да биде блокирана поради нецелосна ензимизација и висока вискозност на примерокот.

Следниве можни причини се како што следува:

1. Нецелосно ензимско варење на примероци од ткиво.

Препорака: Времето на обработка на примерокот на Foregene Protease може соодветно да се продолжи или супернатантот може да се земе по центрифугирање на 12.000 вртежи во минута (~13.400× е) за 5 мин.

2. Прекумерна употреба на примероци од ткиво или големи ткива.

Препорака: Најдобро е да не надминувате 1Букал брис во примерокот;ако примерокот е премногу голем, соодветно зголемете ја дозата на пуфер ST1, Foregene протеаза, пуфер ST2.

3. Вискозноста на примерокот е превисок.

Препорака: Мострите може соодветно да се разредат со 10 mM Tris-HCl пред екстракција на геномската ДНК.

4. Исцицани се фрагменти од крвната карта.

Препорака: Времето на минлива центрифугација на чекор 6 на геномската екстракција на крвна дамка (FTA Card) може соодветно да се продолжи.

Низок принос или без ДНК

Често има различни фактори кои влијаат на приносот на геномската ДНК, вклучувајќи го потеклото на примерокот, условите за складирање на примерокот, подготовката на примерокот, манипулацијата итн.

Геномската ДНК не може да се добие при екстракција

Можните причини се како што следува:

1. Неправилното зачувување на примероците или предолго складирање доведува до деградација на геномската ДНК.

Препорака: Оралните брисеви по можност треба да бидат свежо земени, и не е препорачливо да се користат зачувани брисеви за операции за екстракција на геномска ДНК;примероците од крвна дамка треба да гарантираат дека квалитетот е квалификуван и времето на складирање не треба да биде премногу долго.

2. Премалата употреба на ткиво може да резултира со невадење на соодветната геномска ДНК.

Препорака: Следете гобукаl бришете ги упатствата за земање примероци во упатството за работа и избришете го колку што е можно повеќе за да може доволно клетки да се прикачат на оралниот брис за екстракција на геномска ДНК;за екстракција на примерок од крвна дамка, површината за сечење крвна точка може соодветно да се зголеми.

3. Foregene Protease е неправилно сочувана, што резултира со намалување на нејзината активност или инактивација.

Препорака: Потврдете ги условите за складирање наФoregene Protease или заменете ја со нова Foregene Protease за ензимска реакција.

4. Неправилното зачувување на комплетот или времето на складирање е предолго, што резултира со откажување на некои компоненти во комплетот.

Препорака: Купете новБукал брис ДНКизолација комплет за сродни процедури.

5. Пуфер WB не додава апсолутен етанол.

Препорака: Потврдете дека пуферот WB го додава точниот волумен на апсолутен етанол.

6. Елуентот не е правилно додаден во силиконскиот филм.

Препорака: Додадете 65°Cпретходно загреаниот елуент паѓа до средината на силиконската мембрана и се остава на собна температура 5 минути за да се зголеми ефикасноста на елуцијата.

Lгеномска ДНК со принос изолирани

Следниве можни причини се како што следува:

1. Неправилното зачувување на примероците или предолго складирање доведува до деградација на геномската ДНК.

Препорака: Оралните брисеви се претпочитаат да се земаат свеж примерок, а зачуваните брисеви не треба да се користат за екстракција на геномска ДНК.

2. Ако количината на примерок од ткиво е премала, содржината на извлечената геномска ДНК ќе биде помала.

Препорака: Следете ги упатствата за земање мостри од орален брис во упатството за работа, бришејќи што е можно повеќе пати за да може да се прикачат доволно клетки на оралниот брис за екстракција на геномска ДНК.

3. Foregene Protease е неправилно сочувана, што резултира со намалување на нејзината активност или инактивација.

Препорака: Потврдете ги условите за складирање наthe Foregene Protease или заменете го со нов Foregene протеаза за ензимска реакција.

4. Проблеми со елуентот.

Препорака: Користете пуфер EB за елуција;ако се користи ddH₂O или други елуенти, потврдете дека pH на елуатот е помеѓу 7,0-8,5.

5. Елуатот не е правилно додаден по капка.

Препорака: Додадете капки елуент на средината на силиконската мембрана и оставете на собна температура 5 минути за да ја зголемите ефикасноста на елуцијата.

6. Течноста за елуирање се акумулира премалку.

Препорака: Користете елуент за елуирање на геномската ДНК како што се бара во упатствата, баремне помалку од 15μl.

Lох чистота of геномска ДНКизолирани

Ниската чистота на геномската ДНК може да доведе до неуспех или незадоволителни резултати од низводните експерименти, како што се: ензимите не можат да се отворат, PCR не може да го добие генскиот фрагмент од интерес итн.

Можните причини се како што следува:

1. Загадување со хетеропротеини, загадување со РНК.

Анализа: Колоната за прочистување не беше измиена со користење на Buffer PW;колоната за прочистување на миење Buffer PW не беше измиена со точната центрифугална брзина.

Препорака: Уверете се дека нема таложење во супернатантот пред да додадете етанол;не заборавајте да ја измиете колоната за прочистување според упатствата и овој чекор не може да се испушти.

2. Загадување со нечистотии со јони.

Анализа: Колоната за прочистување со миење пуфер WB беше испуштена или измиена само еднаш, што резултираше со преостаната јонска контаминација.

Препорака: Погрижете се да го измиете Buffer WB 2 пати како што е наведено за да ги отстраните преостанатите јони колку што е можно повеќе.

3. Контаминација со РНК ензими.

Анализа: Странските RN-ази беа додадени во баферот;Операцијата за миење на тампон PW беше неточна, што резултираше со остатоци од RNase, што влијаеше на низводните експериментални операции на РНК, како што е ин витро транскрипцијата.

Препорака: Нуклеинска киселина од серијата Foregeneизолајонските комплети можат да ја отстранат РНК без дополнително додавање на RNase,на тој начин Комплет за изолација на ДНК со букален брис/ФТА картичкапотребно't додадете RNase;не заборавајте да ги следите упатствата за колоната за прочистување на миењето Buffer PW и овој чекор не може да се испушти.

4. Остатоци од етанол.

Анализа: Пуфер WB не изврши центрифугирање со празна цевка по миењето на колоната за прочистување.

Препорака: Изведете ја правилната операција на центрифугирање на празна цевка според упатствата.

5. Друго загадување со нечистотија.

Анализа: Зачуваните примероци или специјалните примероци не се претходно третирани.

Препорака: Темелно претходно обработете го примерокот како што е наведено.